24小时热门版块排行榜    

查看: 2429  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xuzhu598

铁虫 (小有名气)

[求助] 小白请问,cDNA第一条链合成后如何做PCR了?

cDNA第一条链合成结束后,要做PCR扩目的基因片段,该如何做呢?和正常的DNA做PCR一样吗?哪位有详细点的步骤呀!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuzhu598

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-02 22:19:08:
不知道你自己的PCR条件如何,但是你给的这个程序是很常规的程序啊,你觉得哪里可能不妥当?除了30个循环的步骤,可以在前面加个94℃/5 min预变性,最后加个72℃/5 min来延伸。其他没什么特别的了。
72℃延伸时间 ...

嗯,你说的我明白啦,谢谢啦,呵呵,好人开开心心呀1
5楼2011-11-03 12:10:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

和正常PCR一样就可以了。不过cDNA里面不包括内含子,设计引物的时候留意下,别把引物弄到内含子上了。
2楼2011-11-01 17:55:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuzhu598

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-01 17:55:08:
和正常PCR一样就可以了。不过cDNA里面不包括内含子,设计引物的时候留意下,别把引物弄到内含子上了。

那请问下我PCR买的是Takara的,里面PCR的步骤与以前DNA的PCR步骤不是太一样呀?麻烦版主帮帮忙!


3楼2011-11-02 22:01:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 辛苦! 2011-11-03 10:53:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuzhu598 at 2011-11-02 22:01:34:
那请问下我PCR买的是Takara的,里面PCR的步骤与以前DNA的PCR步骤不是太一样呀?麻烦版主帮帮忙!

不知道你自己的PCR条件如何,但是你给的这个程序是很常规的程序啊,你觉得哪里可能不妥当?除了30个循环的步骤,可以在前面加个94℃/5 min预变性,最后加个72℃/5 min来延伸。其他没什么特别的了。
72℃延伸时间根据产物长度调整就可以了,一般Taq酶是1 min/kb。具体参照你的酶的说明书吧。
4楼2011-11-02 22:19:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 24/1200 2026-08-16 10:16 by 启萌科技
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见