24小时热门版块排行榜    

查看: 2431  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xuzhu598

铁虫 (小有名气)

[求助] 小白请问,cDNA第一条链合成后如何做PCR了?

cDNA第一条链合成结束后,要做PCR扩目的基因片段,该如何做呢?和正常的DNA做PCR一样吗?哪位有详细点的步骤呀!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晓风残月cl

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

用目的基因引物  反转录产物cDNA作为模板扩增  就是很普通的
我因为要做表达  最近也在做这些的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2011-11-06 18:15:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

和正常PCR一样就可以了。不过cDNA里面不包括内含子,设计引物的时候留意下,别把引物弄到内含子上了。
2楼2011-11-01 17:55:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuzhu598

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-01 17:55:08:
和正常PCR一样就可以了。不过cDNA里面不包括内含子,设计引物的时候留意下,别把引物弄到内含子上了。

那请问下我PCR买的是Takara的,里面PCR的步骤与以前DNA的PCR步骤不是太一样呀?麻烦版主帮帮忙!


3楼2011-11-02 22:01:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 辛苦! 2011-11-03 10:53:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuzhu598 at 2011-11-02 22:01:34:
那请问下我PCR买的是Takara的,里面PCR的步骤与以前DNA的PCR步骤不是太一样呀?麻烦版主帮帮忙!

不知道你自己的PCR条件如何,但是你给的这个程序是很常规的程序啊,你觉得哪里可能不妥当?除了30个循环的步骤,可以在前面加个94℃/5 min预变性,最后加个72℃/5 min来延伸。其他没什么特别的了。
72℃延伸时间根据产物长度调整就可以了,一般Taq酶是1 min/kb。具体参照你的酶的说明书吧。
4楼2011-11-02 22:19:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见