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xuzhu598

铁虫 (小有名气)

[求助] 小白请问,cDNA第一条链合成后如何做PCR了?

cDNA第一条链合成结束后,要做PCR扩目的基因片段,该如何做呢?和正常的DNA做PCR一样吗?哪位有详细点的步骤呀!
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晓风残月cl

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

用目的基因引物  反转录产物cDNA作为模板扩增  就是很普通的
我因为要做表达  最近也在做这些的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2011-11-06 18:15:11
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查看全部 6 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

和正常PCR一样就可以了。不过cDNA里面不包括内含子,设计引物的时候留意下,别把引物弄到内含子上了。
2楼2011-11-01 17:55:08
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-01 17:55:08:
和正常PCR一样就可以了。不过cDNA里面不包括内含子,设计引物的时候留意下,别把引物弄到内含子上了。

那请问下我PCR买的是Takara的,里面PCR的步骤与以前DNA的PCR步骤不是太一样呀?麻烦版主帮帮忙!


3楼2011-11-02 22:01:34
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 辛苦! 2011-11-03 10:53:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuzhu598 at 2011-11-02 22:01:34:
那请问下我PCR买的是Takara的,里面PCR的步骤与以前DNA的PCR步骤不是太一样呀?麻烦版主帮帮忙!

不知道你自己的PCR条件如何,但是你给的这个程序是很常规的程序啊,你觉得哪里可能不妥当?除了30个循环的步骤,可以在前面加个94℃/5 min预变性,最后加个72℃/5 min来延伸。其他没什么特别的了。
72℃延伸时间根据产物长度调整就可以了,一般Taq酶是1 min/kb。具体参照你的酶的说明书吧。
4楼2011-11-02 22:19:08
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