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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于蛋白表达的问题
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zynmyz

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于蛋白表达的问题

我的目的片段1600多bp 重组质粒也正确 通用引物和交叉PCR均验证过 没问题 测序结果也正确 就是不出蛋白电泳带 请问为什么  IPTG 0.1 0.5 都用过了 温度从15到37都试过了 都不出条带 不知道为什么 请哪位大侠级人物赐教
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1楼 2011-11-01 14:34:37
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蚊在江湖

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！ 2011-11-01 17:39:29
1.看看目的片段中有没有稀有密码子串联

2. 换载体

3.换宿主

4.融合表达还是包涵体表达
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2楼2011-11-01 14:56:36
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zynmyz

新虫 (初入文坛)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励多去应助回帖,有奖励! 2011-11-02 11:57:47
引用回帖:
2楼: Originally posted by 蚊在江湖 at 2011-11-01 14:56:36:
1.看看目的片段中有没有稀有密码子串联

2. 换载体

3.换宿主

4.融合表达还是包涵体表达

首先感谢您赐予的宝贵意见 是这样 我也考虑到了稀有密码子的事了  通过评测的确有一个位置发生了串联，其它的都是分散出现的 是两个密码子紧挨着。载体换过了分别是PET-30a和PGEX6P-2都不行 至于宿主菌我用的BL-21 我们没有别的了 文献上说是包涵体表达 请问哪位高人有ROSSETA菌 可以给我点吗 或者交换 谢谢了
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3楼2011-11-02 00:50:48
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liufeifeia

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我之前也是哪里都对就是不表达，隔了一段时间，又转了一次，IPTG浓度1， 25度，结果就出来了。
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4楼2011-11-03 14:38:06
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