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66suyuan

木虫 (正式写手)

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[求助] SDS-PAGE跑谷蛋白无法浓缩，实验图弥撒的问题

我在做种子谷蛋白SDS-PAGE的实验。最近几次实验都出现了浓缩胶阶段无法浓缩的问题，一直到分离胶都是弥散很宽。

然后结果就很不好分析，这两张还好点，还有更无法分清楚的，条带只能勉强数，但肯定是不能用的三。

之前一直是恒流20mA（横流后，刚开始电压大概50V）跑的，然后我今天又重新试了下，打算浓缩胶部分电压搞高点看行不，就跑了恒压120V（刚开始电流大概60mA），结果还是弥散，已经到分离胶了还是弥散的。结果肯定也不行

敢问有经验的师兄师姐，能帮忙分析下原因吗？？

实验图

这个是我刚刚拍的照片，已经到到了分离胶的地方了，完全没有浓缩到啊！！！

[ Last edited by 66suyuan on 2011-10-21 at 12:17 ]

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1楼 2011-10-21 12:14:04

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银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

你的实验是最近出现这样的情况，也就是说之前是好的？那就基本是你试剂过期了。而弥散，主要是因为：
1.胶的空间结构过于稀疏（可以理解为胶浓度低），导致的分离塔板数较低，以致分离能力差。
2.电压方面只是给它一个外在的力，在分离能力强的情况下（可以理解为胶浓度高，空间结构好），这个外力可以提高，实现更高更省时的分离。通俗地理解液相其实也是这样。
因此，可以和前面的人建议的，更换溶液，重新来过。应该不会出现这样的情况。
祝顺利！