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66suyuan

木虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE跑谷蛋白无法浓缩,实验图弥撒的问题

我在做种子谷蛋白SDS-PAGE的实验。最近几次实验都出现了浓缩胶阶段无法浓缩的问题,一直到分离胶都是弥散很宽。

然后结果就很不好分析,这两张还好点,还有更无法分清楚的,条带只能勉强数,但肯定是不能用的三。

之前一直是恒流20mA(横流后,刚开始电压大概50V)跑的,然后我今天又重新试了下,打算浓缩胶部分电压搞高点看行不,就跑了恒压120V(刚开始电流大概60mA),结果还是弥散,已经到分离胶了还是弥散的。结果肯定也不行

敢问有经验的师兄师姐,能帮忙分析下原因吗??

实验图

这个是我刚刚拍的照片,已经到到了分离胶的地方了,完全没有浓缩到啊!!!



[ Last edited by 66suyuan on 2011-10-21 at 12:17 ]
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的实验是最近出现这样的情况,也就是说之前是好的?那就基本是你试剂过期了。而弥散,主要是因为:
1.胶的空间结构过于稀疏(可以理解为胶浓度低),导致的分离塔板数较低,以致分离能力差。
2.电压方面只是给它一个外在的力,在分离能力强的情况下(可以理解为胶浓度高,空间结构好),这个外力可以提高,实现更高更省时的分离。通俗地理解液相其实也是这样。
因此,可以和前面的人建议的,更换溶液,重新来过。应该不会出现这样的情况。
祝顺利!
7楼2011-10-23 15:16:46
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小兵pp

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流! 2011-10-23 14:53:35
看看电泳缓冲液有没有配错,可以显测下pH看看
2楼2011-10-21 13:08:24
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yitiandeng

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流! 2011-10-23 14:53:44
个人感觉原因应该是多方面的,
电压适宜度,我以前是恒压跑的
缓冲液pH,及其新鲜度,我以前做发现跑过一次的下次跑反而效果还好些呵呵
上样多少也会影响
另外看看你的胶浓度以及配胶的试剂和水
3楼2011-10-21 22:03:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流! 2011-10-23 14:53:52
压缩胶的pH很重要,看配方和Tris有没有问题。
4楼2011-10-21 22:30:41
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