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66suyuan

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[求助] SDS-PAGE跑谷蛋白无法浓缩，实验图弥撒的问题

我在做种子谷蛋白SDS-PAGE的实验。最近几次实验都出现了浓缩胶阶段无法浓缩的问题，一直到分离胶都是弥散很宽。

然后结果就很不好分析，这两张还好点，还有更无法分清楚的，条带只能勉强数，但肯定是不能用的三。

之前一直是恒流20mA（横流后，刚开始电压大概50V）跑的，然后我今天又重新试了下，打算浓缩胶部分电压搞高点看行不，就跑了恒压120V（刚开始电流大概60mA），结果还是弥散，已经到分离胶了还是弥散的。结果肯定也不行

敢问有经验的师兄师姐，能帮忙分析下原因吗？？

实验图

这个是我刚刚拍的照片，已经到到了分离胶的地方了，完全没有浓缩到啊！！！

[ Last edited by 66suyuan on 2011-10-21 at 12:17 ]

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1楼 2011-10-21 12:14:04

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【答案】应助回帖

adslye(BioEPI+1): 2011-10-23 14:53:20
66suyuan(金币+5): 2011-10-24 20:13:16

分离胶我做过6、8、10、12%的，结果压缩程度为12%最好，6%最差，条带很拖。

在很多因素都没法排除的情况下，120伏是不可取的，因为冲得快往往使得本来就差的效果更差。在效果很好的情况下你可以120，但效果本来就差的，就应该更小，比如60，浓缩胶和分离胶都别太快。

胶凝固的因素，可能过硫酸铵失效，配新的。

电泳液的pH值也别搞错了，反正现在还没能找到原因，就每次都用新的，因为旧的可能脏。

跑胶的温度虽然是如果是变性胶就无所谓，但现在效果这么差，不妨降温。缓冲液4度预冷，跑的时候把槽放到装了冰水混合物的盆里。

你的泡泡较多，如果SDS不超过1克每升，那你的缓冲液就该换了。

蛋白质电泳的影响因素太多，很难说的，最好就是什么都换成新的，别去找原因了，可能会浪费时间。