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木左左

银虫 (正式写手)

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注册: 2010-05-17
专业: 基因表达调控与表观遗传学

[求助] PCR成这样，求助！！！

公司做的cDNA，引物，然后是体系，程序自己做的，cDNA公司有没有用内参检测我也不清楚，电泳图下面有，引物一的Tm值64.13，二的Tm值63.95，目的片段GC含量高可以到60%，目的片段出多2300多bp，体系：buffer2.5mg2.0dntp2.0引物0.5酶0.3cDNA1.5和0.5两个，程序95度10分钟，94度45秒，63.5度45秒，72度90秒，15个循环；94度45秒，58.5度45秒72度45秒20个循环，72度10分钟。大家给建议，看看我怎么修改体系和程序，才能有可能扩出目的片段！谢谢

2000马克

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1楼 2011-10-21 11:06:42

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yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)

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【答案】应助回帖

木左左(金币+2): 2011-11-12 22:41:30

模板确定没有问题？
那就换家PCR聚合酶试试。 TAKARA公司，NEB公司等知名常用公司的产品。
GC含量高，如果真的会影响你的PCR效率，找TAKARA公司订购GC-buffer及LA Taq酶。如果再批不出来。十有八九就是你的模板的问题了。

你的电泳图片感觉拍的很不清晰。是你们的的凝胶成像仪不好，还是你跑的电泳效果太差？而且Marker条件也不是很好看。