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毕赤酵母转化
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各位做毕赤酵母转化的大虾们~~ 我现在做毕赤酵母转化想表达一个同源的基因，3.4天后长出来很小很小的白色菌落，但是这些菌落一直维持大小不变，再继续培养or划线or接到液体培养基中培养都不长  ，什么原因啊？还有，这些菌挑起来感觉硬硬的，一颗一颗的。。。制备感受态时分别用invitrogen手册上的方法和网上下的方法（见下文）做好几次了，用的载体是piczA，电转1.5kV，用的是伯乐的电转仪，显示电击时间都在5.5-5.8ms之间，30°复苏2h，涂布新配的YPDS+zeocin平板。 感受态制备方法高效版（网上下的）： 取1ml过夜培养的细胞（od6-10），4℃10000g离心1min，弃上清，1ml无菌水洗一次，同样条件离心，弃上清，用1ml处理液重悬，室温静置20min（处理液：10mMLiCl，10mMDTT，0.6M山梨醇，10mMTrisHCl），同样条件离心，弃上清，加入1ml1M山梨醇，洗涤3次，到最终体积为80ul，加入10ul处理好的质粒，混匀后转入电击杯中，冰浴5min，电击，立即加入1ml冰冷的山梨醇。 |
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啊Q精神
木虫 (小有名气)
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- 专业: 生物化学
6楼2011-11-14 17:29:35
2楼2011-10-23 11:23:29
,我最近做的也是，转化完涂板长了两天，也是长出小小的白色菌落，看着像酵母又不像酵母，不同的是我的板上还长了大的白色菌落，搞不懂是染菌了还是怎么回事~~· 
3楼2011-10-25 17:14:24
4楼2011-10-26 09:56:05