应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 转化遭遇红霉素对大肠杆菌失效！
141/2返回列表12下一页
查看: 3525  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cicilyok

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化遭遇红霉素对大肠杆菌失效！ 已有1人参与

各位同学：
       我现在准备将表达载体pMG36e转入大肠杆菌，转化之后平板(红霉素终浓度250ug/ml)上长满菌（现象如抗生素失效一样），但是红霉素配好之后是经过验证有效的。从转化平板上挑起来的菌转入液体培养基（红霉素终浓度200ug/ml），12小时不长，24小时就长。我已经卡在这一步很久了，望大家不吝赐教~~~感激不尽！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生工检测理论与实务

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-17 00:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖^_^ 2011-10-17 09:04:21
换载体
用pET系列的
赞一下(1人) 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
2楼2011-10-17 01:16:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖交流^_^ 2011-10-17 22:24:22
cicilyok(金币+2): 我也正准备试试 2011-10-19 09:27:46
大肠杆菌本身就能抗很高的红霉素，要不做个梯度试试看，还有红霉素的稳定性如何？
我就偶尔做过，你查查相关文献吧。
赞一下(1人) 回复此楼
微生物发酵
3楼2011-10-17 19:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicilyok

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by scelab at 2011-10-17 01:16:22:
换载体
用pET系列的

我用pMG36e是因为下一步要转乳酸菌做表达，所以载体不能换吧
赞一下 回复此楼
4楼2011-10-19 09:29:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若溪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5): 不错的建议 2011-10-19 12:59:35
cicilyok(金币+2): PCR验证过没有条带 2011-10-19 21:26:53
你可以不通过单纯验证抗性来鉴定转化子。12小时不长，24小时长可能是抗生素长时间失效，或是抗生素浓度只是达到抑制其生长，16小时左右就会长起来。你可以把你弄出来的转化子提取质粒，或是跑个PCR，验证一下，应该比单纯依据抗性来判断要准确
赞一下(1人) 回复此楼
没有比脚更长的路，没有比人更高的山
5楼2011-10-19 10:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

9921218

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by cicilyok at 2011-10-17 00:15:40:
各位同学：
       我现在准备将表达载体pMG36e转入大肠杆菌，转化之后平板(红霉素终浓度250ug/ml)上长满菌（现象如抗生素失效一样），但是红霉素配好之后是经过验证有效的。从转化平板上挑起来的菌转入液体培养 ...

近来在做 构建工作  载体是乳酸菌表达载体Pmg36e,大小约3700bp,目的片段大小约2600.载体用Sma1和HindⅢ双酶切，目的片段用HindⅢ和EcoRⅤ双酶切。连接体系做的是1ul载体   9ul目的片段  连接酶10ul.连接酶用的是宝生物的Solution。连接16小时候转化大肠杆菌感受态细胞。挑取单克隆做菌液PCR,总是得不到阳性克隆。经常都是空载体。
想到你可能已经解决了，求指点！！！
赞一下 回复此楼
七彩泡泡
6楼2012-01-10 13:26:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

元雪浈

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

那你可能是连接没做好，建议连接后用PCR验证下，在做转化
赞一下 回复此楼
祝各位虫友实验顺利！
7楼2012-08-30 10:14:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱莫若月

木虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2012-08-30 18:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱莫若月

木虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2012-08-30 18:25:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

water9yoyo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 9921218 at 2012-01-10 13:26:04
近来在做 构建工作  载体是乳酸菌表达载体Pmg36e,大小约3700bp,目的片段大小约2600.载体用Sma1和HindⅢ双酶切，目的片段用HindⅢ和EcoRⅤ双酶切。连接体系做的是1ul载体   9ul目的片段  连接酶10ul.连接酶用的是宝 ...

我和你出现相同情况，你的问题最后是怎么解决的
赞一下 回复此楼
成功靠自己
10楼2013-06-14 15:54:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cicilyok 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 18/900 2026-08-25 14:50 by Weed114114
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 +4 ziyangfang 2026-08-25 4/200 2026-08-25 14:41 by ZJTJZ
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +6 yuleib84 2026-08-25 7/350 2026-08-25 14:40 by 六两废铜
[基金申请] 什么时候开奖？ +12 CrisMessi 2026-08-18 13/650 2026-08-25 14:40 by ZJTJZ
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭