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cicilyok

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化遭遇红霉素对大肠杆菌失效! 已有1人参与

各位同学:
       我现在准备将表达载体pMG36e转入大肠杆菌,转化之后平板(红霉素终浓度250ug/ml)上长满菌(现象如抗生素失效一样),但是红霉素配好之后是经过验证有效的。从转化平板上挑起来的菌转入液体培养基(红霉素终浓度200ug/ml),12小时不长,24小时就长。我已经卡在这一步很久了,望大家不吝赐教~~~感激不尽!
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water9yoyo

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 9921218 at 2012-01-10 13:26:04
近来在做 构建工作  载体是乳酸菌表达载体Pmg36e,大小约3700bp,目的片段大小约2600.载体用Sma1和HindⅢ双酶切,目的片段用HindⅢ和EcoRⅤ双酶切。连接体系做的是1ul载体   9ul目的片段  连接酶10ul.连接酶用的是宝 ...

我和你出现相同情况,你的问题最后是怎么解决的
成功靠自己
10楼2013-06-14 15:54:37
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water9yoyo

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 啊绰 at 2013-09-24 20:24:17
我和你的情况也是一样的,咋解决的呢,好怕毕不了业啊!...

多化转几次用30度培养,抗性提到180,会长单菌的
成功靠自己
12楼2013-09-30 17:03:06
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