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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 转化遭遇红霉素对大肠杆菌失效！
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cicilyok

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化遭遇红霉素对大肠杆菌失效！ 已有1人参与

各位同学：
       我现在准备将表达载体pMG36e转入大肠杆菌，转化之后平板(红霉素终浓度250ug/ml)上长满菌（现象如抗生素失效一样），但是红霉素配好之后是经过验证有效的。从转化平板上挑起来的菌转入液体培养基（红霉素终浓度200ug/ml），12小时不长，24小时就长。我已经卡在这一步很久了，望大家不吝赐教~~~感激不尽！
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1楼 2011-10-17 00:15:40
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9921218

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by cicilyok at 2011-10-17 00:15:40:
各位同学：
       我现在准备将表达载体pMG36e转入大肠杆菌，转化之后平板(红霉素终浓度250ug/ml)上长满菌（现象如抗生素失效一样），但是红霉素配好之后是经过验证有效的。从转化平板上挑起来的菌转入液体培养 ...

近来在做 构建工作  载体是乳酸菌表达载体Pmg36e,大小约3700bp,目的片段大小约2600.载体用Sma1和HindⅢ双酶切，目的片段用HindⅢ和EcoRⅤ双酶切。连接体系做的是1ul载体   9ul目的片段  连接酶10ul.连接酶用的是宝生物的Solution。连接16小时候转化大肠杆菌感受态细胞。挑取单克隆做菌液PCR,总是得不到阳性克隆。经常都是空载体。
想到你可能已经解决了，求指点！！！
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七彩泡泡
6楼2012-01-10 13:26:04
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖^_^ 2011-10-17 09:04:21
换载体
用pET系列的
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小木虫之有关部门负责人
2楼2011-10-17 01:16:22
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hkfgwww

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖交流^_^ 2011-10-17 22:24:22
cicilyok(金币+2): 我也正准备试试 2011-10-19 09:27:46
大肠杆菌本身就能抗很高的红霉素，要不做个梯度试试看，还有红霉素的稳定性如何？
我就偶尔做过，你查查相关文献吧。
赞一下(1人) 回复此楼
微生物发酵
3楼2011-10-17 19:47:32
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cicilyok

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by scelab at 2011-10-17 01:16:22:
换载体
用pET系列的

我用pMG36e是因为下一步要转乳酸菌做表达，所以载体不能换吧
赞一下 回复此楼
4楼2011-10-19 09:29:16
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