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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

[求助] 我的PCR电泳图怎么这样的啊。。。

我用的是底泥提取出来的DNA，其260/280,260/230达到1.8,1.9的样子，应该还不错。我选用的引物是16SrDNA V3区的通用引物，27F和1495R。PCR条件是参考文献的，采用降落式。为什么电泳图会变成这样呢。自右手边起第一个是Marker，第二个是空白，而且我每次做的空白经常会有条带出现，做了好多次总是不能出现满意的结果，很着急。请各位不吝赐教，先谢谢了。

PCR电泳图
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科研真辛苦！
1楼 2011-10-13 10:26:23
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shrimp5555

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是你的DNA出问题啦？对了，跑胶的时候电压不要太大啊，不然就会出现拖尾的
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大大傻气加上少少耍流氓
4楼2011-10-13 11:09:57
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-13 19:46:12
1,方向反了，一般习惯都是胶孔在上面
2，从你的marker来看，应该是电泳除了问题
建议更换新的电泳液，重新做胶（琼脂糖浓度高一些，胶硬一些），还有就是降低电压重新跑
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树宝宝zyx
显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-10-13 11:04:12
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

树宝宝zyx(金币+2): 2011-10-13 16:20:59
空白出条带，请问是怎么设置的空白？只有水？还是除了底物之外都加了？如果是后者的话可能是引物二聚体，或者是别的东西有DNA污染了，如果是前者，那就神奇了……
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显微镜下的世界很精彩！
3楼2011-10-13 11:06:12
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另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-13 12:28:28
树宝宝zyx(金币+2): 2011-10-13 16:20:39
1.空白也有条带，应该是交叉污染了。
2.你的PCR条带不清晰，是不是pcr没扩好？重新做一次（确保加样正确），还是不行的话就换PCR条件，可以自己摸索。一般是
                      95度     5min
                      {95        30s
                    55-57      30s（看你自己的引物）
                     72          1min（看你的DNA大小，一般1kb/min）}  
                      25-35个循环
                      72度     7min
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5楼2011-10-13 11:55:55
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