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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

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[求助] 我的PCR电泳图怎么这样的啊。。。

我用的是底泥提取出来的DNA，其260/280,260/230达到1.8,1.9的样子，应该还不错。我选用的引物是16SrDNA V3区的通用引物，27F和1495R。PCR条件是参考文献的，采用降落式。为什么电泳图会变成这样呢。自右手边起第一个是Marker，第二个是空白，而且我每次做的空白经常会有条带出现，做了好多次总是不能出现满意的结果，很着急。请各位不吝赐教，先谢谢了。

PCR电泳图

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科研真辛苦！

1楼2011-10-13 10:26:23

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另一个天堂

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-13 12:28:28
树宝宝zyx(金币+2): 2011-10-13 16:20:39

1.空白也有条带，应该是交叉污染了。
2.你的PCR条带不清晰，是不是pcr没扩好？重新做一次（确保加样正确），还是不行的话就换PCR条件，可以自己摸索。一般是
                  95度    5min
                  {95       30s
                  55-57    30s（看你自己的引物）
                  72       1min（看你的DNA大小，一般1kb/min）}
                  25-35个循环
                  72度    7min