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SDS-PAGE出现奇怪的拖尾
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本科时候跑了一年的E.coli，从来没出现这种情况： 用Pre-cast的胶，前两次跑过没问题，条带清晰蛋白分离很好；电泳缓冲液也是公司的，自己稀释，也是没问题的。电压一直是200V。跑的是全菌，不诱导表达的那种 现象：同一片胶Marker和另一种菌没有拖尾，但是E.coli拖尾严重，跑的时候就看到了，染色后一片模糊。E.coli的样品是新制的，小试管2ml培养7小时，样品处理方式不变，收菌后dI WATER洗两次，加loading buffer煮5分钟，上样量不大（按之前的经验值，上两次跑出的条带清晰分明）。 跑完以后想会不会是杂菌污染之类的问题，或者摇菌时间过长（36C，200rpm），重新挑单菌落接种，4小时培养。煮菌后不到5分钟就上样了依然拖尾，Marker和另一种菌则没有拖尾！！第二次跑胶时候看到上样孔那有残留物，但我确定用移液枪吸取样品时候没有粘稠状的东西~ 求助各位，是不是DNA降解呢？但是之前相同条件，跑E.coli全菌，一直没有这种情况发生，即使是反复冻融的样品或者过夜培养，都没出现类似问题。请问出现了什么问题我忽略了的，应该怎么解决呢？ [ Last edited by 1949stone on 2011-9-29 at 11:39 ] |
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7楼2011-09-29 10:50:47
分子菜鸟
木虫 (小有名气)
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