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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如果目的条带跟非特异扩增的条带太近能回收吗
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XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

[求助] 如果目的条带跟非特异扩增的条带太近能回收吗

我想请教一下：如果我的目的片段大小190bp，然后我扩增出来的在100bp左右也有条带，在250bp以下也有，并且这两条带距离很近，那样的话，我还能做胶回收吗？如果能的话，应该如何做呢！希望各位大侠能多多指教一下，期待你们的回答！
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1楼 2011-09-17 17:40:34
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临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by XUMIN6891 at 2011-09-17 17:40:34:
我想请教一下：如果我的目的片段大小190bp，然后我扩增出来的在100bp左右也有条带，在250bp以下也有，并且这两条带距离很近，那样的话，我还能做胶回收吗？如果能的话，应该如何做呢！希望各位大侠能多多指教一下 ...

还是不要回收了，到时候连在载体上的可能就不是比的基因了
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2楼2011-09-17 21:33:29
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XUMIN6891

金虫 (初入文坛)
那我那段片段本身就小，扩出之后老有非特异性，你有没有什么好的办法能让非特异性减少。
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3楼2011-09-18 08:20:50
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

首先跑胶的时候多跑一会儿，割的时候割的薄一点，回收，以此为模板再P一次，一般像你这样大小的片段PCR出现突变的机率不是很大，可以这样干
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4楼2011-09-18 21:16:12
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

为什么不能？完全可以！
连到载体上面的时候，多挑几个克隆，再从中PCR鉴定出你要的！
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真相是最大的奢侈品
5楼2011-09-19 08:55:08
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320080920001

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

总结以上的方法：
1.可以加大胶浓度，跑胶时间加长，切胶切薄一些。（甚至可以以此回收的模版在做一次PCR。）
2.连接到载体上，多挑几个单克隆，做菌液PCR鉴定。再提质粒。
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6楼2011-09-19 09:28:31
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

【答案】应助回帖

~楼主提高琼脂糖胶浓度（2%~3%)再延长电泳时间~完全可以分离~
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仕不可不弘毅，任重而道远
7楼2011-09-19 11:12:26
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清风寨

银虫 (小有名气)
可以 按楼上的说法做
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冷风过心变热
8楼2011-09-19 11:16:13
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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-19 08:55:08:
为什么不能？完全可以！
连到载体上面的时候，多挑几个克隆，再从中PCR鉴定出你要的！

同意！
我也经常这么干！
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9楼2011-09-19 13:44:53
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