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380218013

金虫 (小有名气)

[求助] 如何加polyA尾巴。

小弟用高保真酶PCR,胶回收之后想与T载体相连,需要在产物后加polyA的尾巴。在网上看到说纯化后加Taq酶72度10min 。但是是否还要加buffe等其他的试剂?如果加,加的体系是多少?反应条件是什么?小弟想知道具体的步骤。


请有过实战经验的大虾们帮忙!谢谢!
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好好生活,努力赚钱
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madengyu

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

9楼2011-09-18 16:54:44
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查看全部 10 个回答

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-14 07:32:29
380218013(金币+1): 好像只要72度 30min 吧 要加buffer 什么的 2011-09-14 16:44:06
跟你平时做PCR的体系一样,只不过将dNTP换成dATP !
真相是最大的奢侈品
2楼2011-09-13 22:00:19
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-14 18:14:20
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-13 22:00:19:
跟你平时做PCR的体系一样,只不过将dNTP换成dATP !

跟你平时做PCR的体系一样,只不过将dNTP换成dATP !
扩增程序就按你说的就可以了!
真相是最大的奢侈品
3楼2011-09-14 17:50:26
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 是这样的 2011-09-14 22:14:22
不用了,就在pfu程序完了后,加点儿taq酶就可以了,不需要再加什么dATP的!
致良知
4楼2011-09-14 21:44:43
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