应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何加polyA尾巴。
101/1返回列表
查看: 9285  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

380218013

金虫 (小有名气)

[求助] 如何加polyA尾巴。

小弟用高保真酶PCR，胶回收之后想与T载体相连，需要在产物后加polyA的尾巴。在网上看到说纯化后加Taq酶72度10min 。但是是否还要加buffe等其他的试剂？如果加，加的体系是多少？反应条件是什么？小弟想知道具体的步骤。


请有过实战经验的大虾们帮忙！谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
好好生活，努力赚钱
1楼 2011-09-13 21:37:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-14 07:32:29
380218013(金币+1): 好像只要72度 30min 吧 要加buffer 什么的 2011-09-14 16:44:06
跟你平时做PCR的体系一样，只不过将dNTP换成dATP ！
赞一下(1人) 回复此楼
真相是最大的奢侈品
2楼2011-09-13 22:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-14 18:14:20
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-13 22:00:19:
跟你平时做PCR的体系一样，只不过将dNTP换成dATP ！

跟你平时做PCR的体系一样，只不过将dNTP换成dATP ！
扩增程序就按你说的就可以了！
赞一下(1人) 回复此楼
真相是最大的奢侈品
3楼2011-09-14 17:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 是这样的 2011-09-14 22:14:22
不用了，就在pfu程序完了后，加点儿taq酶就可以了，不需要再加什么dATP的！
赞一下(1人) 回复此楼
致良知
4楼2011-09-14 21:44:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alice

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-09-14 21:44:43:
不用了，就在pfu程序完了后，加点儿taq酶就可以了，不需要再加什么dATP的！

可以吗？我之前按胶回收后加dATP，72度加A好像不行呢...
赞一下 回复此楼
To be strong enough
5楼2011-09-16 10:43:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoche

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-17 10:49:32
就后期加点你普通的PCR反应mix, 你用的酶不产生A粘端，随便加点普通的taq酶，然后加点buffer,dNTP,在72度反应十分钟就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-09-16 15:44:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-17 10:49:41
我是回收后，加buffer，加dATP，加一般的酶，然后72度半小时，连上去了。
方法较复杂，可参考上面的简单方法！
赞一下(1人) 回复此楼
真相是最大的奢侈品
7楼2011-09-16 16:17:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-18 08:12:34
380218013(金币+4): 谢谢啊 ！ 看到 2011-09-19 11:16:30
建议楼主去看看promega的T载体说明书，上面有很好的解释。而且向楼上极为所说的，用高保真酶PCR完，不回收，直接加A，这样可能加不上，因为高保真酶具有3‘-5’外切酶的活性，你刚加上就被切掉了。。。。这些在promega的T载体都有说明的。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-09-17 22:48:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

madengyu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2011-09-18 16:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-09-17 22:48:52:
建议楼主去看看promega的T载体说明书，上面有很好的解释。而且向楼上极为所说的，用高保真酶PCR完，不回收，直接加A，这样可能加不上，因为高保真酶具有3‘-5’外切酶的活性，你刚加上就被切掉了。。。。这些在pr ...

说明书上没有啊 大哥。。你把你的说明书发给我？？chengchunming2006@yahoo.com.cn 谢谢
赞一下 回复此楼
好好生活，努力赚钱
10楼2011-09-18 20:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 380218013 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +3 wangyl_123 2026-10-10 6/300 2026-10-11 15:04 by Abin0406
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭