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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌中终止密码子通读现象求助
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chaoen

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌中终止密码子通读现象求助

Dear all,

Recently I found one of my mutants contains stop codon before 100 aminoacid to the end. When I checked the expression by SDS-page, and found there are two equally dense bands (one supposed to be the partial protein and the other is the full protein).
The stop codon for my case is TAG. I know it is reasonable it can be bypassed with stopcodon.
Now I am wondering which amino acid will be translated to in case of the stop codon readthrough? and Which strategy can be applied to make the stop codon efficiently to stop expression fully at that position?
Thanks in advance!

Any suggestion is welcome!
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1楼 2011-08-31 15:33:15
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chaoen

木虫 (正式写手)
在线等待
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2楼2011-08-31 20:40:06
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jtliuok

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

Add two or three stop codons will be ok.
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坚持就是胜利！
3楼2011-10-12 20:29:04
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-13 10:37:28
chaoen(金币+5): 2011-11-05 21:04:08
首先，需要用数据证明是通读，挖胶测序；因为不能排除大肠杆菌对其的修饰或者大肠杆菌的某个被激活的蛋白质表达
其次，如果仅仅是表达一个蛋白质的话，可以在连接入载体的末端的酶切位点中间插入一个带有终止子的片段。
PS，有的时候确实是有这样的现象，所以做一些严谨性的表达的时候，我们通常都要考虑通读的事件！
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致良知
4楼2011-10-12 22:24:54
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kenan8848

新虫 (小有名气)
换成TAA试试，分子生物学书上说UAA最常用，UGA比UAG的使用频率高，但UGA出错的可能性更大些
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真相只有一个
5楼2016-01-16 00:24:07
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