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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达菌液裂解
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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 原核表达菌液裂解

原核表达时取取500微升菌液，12000rpm离心1min，弃上清，用50微升灭菌水重悬后加50微升2×上样buffer，然后100℃煮沸5min，12000rpm离心1min，然后取上清，20微升装一管，可是当我吸到最后的时候没有看到有沉淀啊？因为上样buffer颜色太深了，沉淀也不是特别容易观察，我想请问大家做的时候都能看到沉淀吗？
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1楼 2011-08-26 18:19:03
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quiller2000

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-08-27 09:25:54
friya0910(金币+1): 2011-08-27 10:04:48
你这个可能是你的菌体较少，而且loading buf颜色较深，不过长时间离心应该是有沉淀的，至少有细胞碎片

走个胶看看吧，没有那么神奇的，最低还有细胞的蛋白质呢
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-08-26 23:22:26
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quiller2000

木虫 (著名写手)
★ ★
friya0910(金币+1): 2011-08-27 12:37:54
friya0910(金币+1): 2011-08-28 14:40:36
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-08-28 16:56:29
如果你是BL21(DE3)，可以取1-2ml，最后溶解到50-100vl loading buf中，然后上样，其实看你的胶的分辨率；这个比较常规，没有什么神奇的；DE3有几条特征带，要注意你的蛋白质大小不要“碰巧”和他们一样大！呵呵
赞一下(2人) 回复此楼
12楼2011-08-27 11:37:34
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