| 查看: 5065 | 回复: 14 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
请教脂肪酶活性测定
|
|||
|
大家好，问个酶学的基本问题。 我利用分光光度计法pNPB测脂肪酶活性，测405nm处连续光吸收，根据初速度得到斜率，请问如何根据斜率来计算酶活结果，非常感谢！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 生工检测理论与实务 |
» 猜你喜欢
2025年遐想
已经有4人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
-
自然科学基金委宣布启动申请书“瘦身提质”行动
已经有4人回复
-
求个博导看看
已经有18人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- p-NPP法测定脂肪酶活性p-NP标准曲线问题
已经有9人回复
- 霉菌脂肪酶活性的测定
已经有9人回复
- P-Npp法测脂肪酶活性
已经有4人回复
- 细菌脂肪酶活性的测定
已经有12人回复
- 发酵液中脂肪酶的活力用什么方法测定
已经有14人回复
- 脂肪酶活力测定
已经有10人回复
- 【求助/交流】滴定法测脂肪酶活性
已经有13人回复
- 【求助/交流】脂肪酶活性检测
已经有17人回复
- 【求助/交流】请教脂肪酶活力测定
已经有6人回复
- 【求助】脂肪酶活力测定
已经有5人回复
- 【求助/交流】醛基修饰的氨基载体 （戊二醛交联） 固定化脂肪酶 没有活性（失活）
已经有12人回复
- 【求助/交流】哪位高手给指点下脂肪酶活性测定
已经有3人回复
- 【求助】有人做过脂肪酶或脂肪氧化酶活力测定的么？
已经有12人回复
cexoihtydx
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 12
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 581.3
- 散金: 906
- 红花: 5
- 帖子: 766
- 在线: 263.3小时
- 虫号: 722752
- 注册: 2009-03-14
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
看天(金币+5, BioEPI+1): 鼓励热心回答 2011-08-26 12:53:19
看天(金币+5, BioEPI+1): 鼓励热心回答 2011-08-26 12:53:19
|
脂肪酶活性测定 1 pNP-乙腈-丙酮标准曲线的构建： 原液：将pNP溶解与PBS（PH6.5,0.01M）和乙腈，丙酮溶液中。 稀释液：及与配置原液时相同体积的PBS，乙腈，丙酮溶液。 10ml测试体系：原液投入量+稀释液投入量 = 10ml 空白对照：稀释液10ml 8组测试组：原液不同投入梯度+ 相应稀释液 = 10ml. 测OD405,得到标准曲线方程y = A x + B,和斜率 2 脂肪酶的酶活测定: Lipase 的游离酶的酶活测定: 第一步:称取 Lipase 干粉(精酶),用10ml PH6.5 0.01m的PBS溶解保存. 第二步:移取上面配制的酶液50ul于摇瓶中,再加入PH 6.5 0.01m的PBS 2.8ml,在摇床中37度,150rpm 条件下震荡几分钟后加入10mM 的对硝基苯酚乙酯150ul,加入后立即计时三分钟反应.。 第三步:三分钟反应结束后立即加入丙酮3ml终止反应,继续震荡几分钟后过滤,取滤液静态测OD405 值. 空白配制：PH 6.5 0.01m的PBS 2.85ml+对硝基苯酚乙酯+丙酮 3 比活力计算 将测得的0D405，代入标准曲线方程，根据活力测定反应体积，脂肪酶蛋白浓度和反应时间，得到比活力：X um/min/mg |
6楼2011-08-26 12:44:57