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friya0910

新虫 (正式写手)

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[交流] 转化连接遇到的奇怪的事！

昨天做了转化涂板，今天的结果让我很无语啊
用的载体是pET32a，共做了七个板，具体结果如下
载体加目的片段的连接液，取10微升转化DH5a（感受态新买的，第一次用），取10微升转化TOP 10，结果TOP 10 长得很好，DH5a没长
酶切过的载体做连接，转化DH5a，结果没长
酶切过得载体加目的片段未作连接，转化DH5a长了2个
原载体质粒转化（阳性对照）转化DH5a长了1个

这是个什么状况啊？我感觉是新买的感受态出问题了！那这样我的对照都没有意义了吗？

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1楼 2011-08-16 09:28:57

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lalafeng

银虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-08-16 11:38:46

可以先验证转化板上的菌是否是真转化子，如果验证是的，则DH5a很可能有问题了，我们实验室都是自己做感受态的，感觉也不错

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3楼2011-08-16 10:05:03

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friya0910

新虫 (正式写手)

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引用回帖:

1楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-16 09:28:57:
昨天做了转化涂板，今天的结果让我很无语啊
用的载体是pET32a，共做了七个板，具体结果如下
载体加目的片段的连接液，取10微升转化DH5a（感受态新买的，第一次用），取10微升转化TOP 10，结果TOP 10 长得很好， ...

怎么没人回复啊？自己先顶一个啦！
补充点信息，当时做完转化之后摇了1h多点就取200微升涂板了，吸取DH5a时感觉已经浑浊，但吸取TOP 10感觉好像还没浑浊，涂完板后我又将TOP 10放回37度又振荡培养了2h，然后吸100微升涂板，接着又把剩下的离心，去除部分培养基后涂板，结果培养了差不多12h菌就已经长得密密麻麻了！
因为没有对照，也不知道长出来的TOP 10 有没有我要的阳性克隆，今天先挑几个试试吧！

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2楼2011-08-16 09:48:04

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