24小时热门版块排行榜    

查看: 877  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

friya0910

新虫 (正式写手)


[交流] 转化连接遇到的奇怪的事!

昨天做了转化涂板,今天的结果让我很无语啊
用的载体是pET32a, 共做了七个板,具体结果如下
载体加目的片段的连接液,取10微升转化DH5a(感受态新买的,第一次用),取10微升转化TOP 10,结果TOP 10 长得很好,DH5a没长
酶切过的载体做连接,转化DH5a,结果没长
酶切过得载体加目的片段未作连接,转化DH5a长了2个
原载体质粒转化(阳性对照)转化DH5a长了1个

这是个什么状况啊?我感觉是新买的感受态出问题了!那这样我的对照都没有意义了吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lalafeng

银虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-08-16 11:38:46
可以先验证转化板上的菌是否是真转化子,如果验证是的,则DH5a很可能有问题了,我们实验室都是自己做感受态的,感觉也不错
3楼2011-08-16 10:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

friya0910

新虫 (正式写手)


引用回帖:
1楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-16 09:28:57:
昨天做了转化涂板,今天的结果让我很无语啊
用的载体是pET32a, 共做了七个板,具体结果如下
载体加目的片段的连接液,取10微升转化DH5a(感受态新买的,第一次用),取10微升转化TOP 10,结果TOP 10 长得很好, ...

怎么没人回复啊?自己先顶一个啦!
补充点信息,当时做完转化之后摇了1h多点就取200微升涂板了,吸取DH5a时感觉已经浑浊,但吸取TOP 10感觉好像还没浑浊,涂完板后我又将TOP 10放回37度又振荡培养了2h,然后吸100微升涂板,接着又把剩下的离心,去除部分培养基后涂板,结果培养了差不多12h菌就已经长得密密麻麻了!
因为没有对照,也不知道长出来的TOP 10 有没有我要的阳性克隆,今天先挑几个试试吧!
2楼2011-08-16 09:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by lalafeng at 2011-08-16 10:05:03:
可以先验证转化板上的菌是否是真转化子,如果验证是的,则DH5a很可能有问题了,我们实验室都是自己做感受态的,感觉也不错

我用的是天根的感受态,之前都挺好的,不知道这次是怎么了!
下午挑菌,明天先验证几个看看,但愿有好运吧!幸好带做了一管TOP 10 不然出了什么问题都不知道,长了个教训,以后受到感受态还是先验证一下比较好啊!
4楼2011-08-16 10:08:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 00:25 by xxniao123
[基金申请] 基金不中,共勉 +5 eulota 2026-08-26 5/250 2026-08-26 23:33 by young90
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 +4 晴天加油 2026-08-26 5/250 2026-08-26 21:27 by 木风9012
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +26 yaoyewhu2008 2026-08-20 28/1400 2026-08-26 13:49 by zzuzxg
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
请填处理意见