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friya0910

新虫 (正式写手)


[交流] 转化连接遇到的奇怪的事!

昨天做了转化涂板,今天的结果让我很无语啊
用的载体是pET32a, 共做了七个板,具体结果如下
载体加目的片段的连接液,取10微升转化DH5a(感受态新买的,第一次用),取10微升转化TOP 10,结果TOP 10 长得很好,DH5a没长
酶切过的载体做连接,转化DH5a,结果没长
酶切过得载体加目的片段未作连接,转化DH5a长了2个
原载体质粒转化(阳性对照)转化DH5a长了1个

这是个什么状况啊?我感觉是新买的感受态出问题了!那这样我的对照都没有意义了吗?
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friya0910

新虫 (正式写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by lalafeng at 2011-08-16 10:05:03:
可以先验证转化板上的菌是否是真转化子,如果验证是的,则DH5a很可能有问题了,我们实验室都是自己做感受态的,感觉也不错

我用的是天根的感受态,之前都挺好的,不知道这次是怎么了!
下午挑菌,明天先验证几个看看,但愿有好运吧!幸好带做了一管TOP 10 不然出了什么问题都不知道,长了个教训,以后受到感受态还是先验证一下比较好啊!
4楼2011-08-16 10:08:46
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friya0910

新虫 (正式写手)


引用回帖:
1楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-16 09:28:57:
昨天做了转化涂板,今天的结果让我很无语啊
用的载体是pET32a, 共做了七个板,具体结果如下
载体加目的片段的连接液,取10微升转化DH5a(感受态新买的,第一次用),取10微升转化TOP 10,结果TOP 10 长得很好, ...

怎么没人回复啊?自己先顶一个啦!
补充点信息,当时做完转化之后摇了1h多点就取200微升涂板了,吸取DH5a时感觉已经浑浊,但吸取TOP 10感觉好像还没浑浊,涂完板后我又将TOP 10放回37度又振荡培养了2h,然后吸100微升涂板,接着又把剩下的离心,去除部分培养基后涂板,结果培养了差不多12h菌就已经长得密密麻麻了!
因为没有对照,也不知道长出来的TOP 10 有没有我要的阳性克隆,今天先挑几个试试吧!
2楼2011-08-16 09:48:04
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lalafeng

银虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-08-16 11:38:46
可以先验证转化板上的菌是否是真转化子,如果验证是的,则DH5a很可能有问题了,我们实验室都是自己做感受态的,感觉也不错
3楼2011-08-16 10:05:03
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