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duanming123木虫 (正式写手)
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[求助]
actin扩不出来？
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刚反转录出的cDNA, actin扩不出来，引物没问题，用的是Mix,模板稀释了5倍，RNA质量还行，是不是模板浓度太高了，在稀释做做？大家谁遇到种问题？ |
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5楼2011-09-09 08:09:50
2楼2011-08-14 01:55:43
qingyuansw20
金虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
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adslye(金币+1): 反转录一般20Ul体系2ugRNA没问题，cdna可以电泳看 2011-08-14 09:20:42
adslye(金币+1): 鼓励交流，cdna跑电泳没意义 2011-08-14 09:22:36
duanming123(金币+1): 5 2011-08-14 17:10:49
adslye(金币+1): 反转录一般20Ul体系2ugRNA没问题，cdna可以电泳看 2011-08-14 09:20:42
adslye(金币+1): 鼓励交流，cdna跑电泳没意义 2011-08-14 09:22:36
duanming123(金币+1): 5 2011-08-14 17:10:49
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1、RNA浓度问题，不知道你测定RNA浓度了吗？一个反转录体系RNA浓度要求在500ng以内。高了不行。超了引物浓度还怎么扩？一般我提出的总RNA，要稀释20倍以上。 2、CDNA没成，建议反转录后做个电泳看下，CDNA电泳一条带。 3、PCR时，内参相当容易出。按着说明书就能出。我分析是你前面的问题。 |
3楼2011-08-14 08:43:44
adslye
银虫 (正式写手)
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4楼2011-08-14 09:26:14