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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1949stone(MolEPI+1): 天使大哥 要epi好办啊 2011-08-10 20:51:51
1:楼主的目的片段285bp,确实太小了,20ul体系添加10ul重组载体,然后进行酶切,当然是可以酶切开的,但是你的目的片段由于太小了,所以导致出来的质量太小而很淡,这样做链接的话成功的概率确实很低;何不扩大你的酶切体系至50ul或者更多,然后多添加一些酶,多切一会,然后跑个电泳,做一个切胶纯化,然后再跑电泳定量一下,做一个连接,这样成功概率会大很多;
2:当然了,我还是建议你直接用原来基因的引物做一个PCR,然后纯化,酶切,再纯化,然后进行连接,这样也是很快的,而且成功率也比较高的!

祝好运!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-08-10 20:50:11
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智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

imfly77

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2, MolEPI+1): 连上面几个回帖一起授予MolEPI 2011-08-11 11:58:52
引用回帖:
13楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-11 10:25:51:
我有TaKaRa的LA Taq,不知道可以不可以?

可以。另外LA Taq一般都是用在高GT基因的扩增,对通常的PCR用的不多,不过对你这个体系应该是没问题的。——就一个小PCR而已,没必要纠结啦。

btw:推荐去买点Transgen的fast pfu吧,那个酶挺好用的。
14楼2011-08-11 10:39:28
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