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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体的构建
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
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1949stone(MolEPI+1): 天使大哥 要epi好办啊 2011-08-10 20:51:51
1：楼主的目的片段285bp，确实太小了，20ul体系添加10ul重组载体，然后进行酶切，当然是可以酶切开的，但是你的目的片段由于太小了，所以导致出来的质量太小而很淡，这样做链接的话成功的概率确实很低；何不扩大你的酶切体系至50ul或者更多，然后多添加一些酶，多切一会，然后跑个电泳，做一个切胶纯化，然后再跑电泳定量一下，做一个连接，这样成功概率会大很多；
2：当然了，我还是建议你直接用原来基因的引物做一个PCR，然后纯化，酶切，再纯化，然后进行连接，这样也是很快的，而且成功率也比较高的！

祝好运！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-08-10 20:50:11
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智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

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科研从小木虫开始，人人为我，我为人人

imfly77

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2, MolEPI+1): 连上面几个回帖一起授予MolEPI 2011-08-11 11:58:52
引用回帖:
13楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-11 10:25:51:
我有TaKaRa的LA Taq，不知道可以不可以？

可以。另外LA Taq一般都是用在高GT基因的扩增，对通常的PCR用的不多，不过对你这个体系应该是没问题的。——就一个小PCR而已，没必要纠结啦。

btw：推荐去买点Transgen的fast pfu吧，那个酶挺好用的。
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14楼2011-08-11 10:39:28
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