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westen blot 转膜
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做westen blot 时转膜结束后硝酸纤维素膜上未见预染的Marker 条带，翻看滤纸上也没见任何颜色，是出什么问题了嘛？ 我用的是200mA,1H,，放置时黑色板朝向黑面，没放错。 |
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dianaofyezi
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小兵pp
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dianaofyezi
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9楼2011-08-09 17:51:54
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silicare(金币+5): 鼓励交流 2011-10-24 11:52:38
silicare(金币+5): 鼓励交流 2011-10-24 11:52:38
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SDS-page电泳时的预染Marker，在胶上有清晰的显示，加样Buffer的痕迹也很明显。但转膜后就没见任何有颜色的东西了。求原因求指教啊 转硝酸纤维素膜时用的电流是200mA，1h， 硝酸纤维素膜在放到胶表面前是用甲醇浸泡10秒钟的，这点老师叮嘱过的，应是不容更改的。 转膜时我是在托水盘中做的转印三明治，所以气泡的干扰可以排除。 转膜后封闭，封闭后一抗，一抗后PBST，洗三遍，一洗后二抗，然后再PBST洗三次，然后去离子水冲一下，然后染色，结果是没东西啊，呈现的是一片模糊的蓝色。 以前做的时候有时候会见蓝色带在膜上，有时候也会没有，但不管有没有最后的结果总会出条带的，就是好与差得区别，但现在直接是不出条带了！！！ 自我感觉转膜的嫌疑最大，但不能肯定。另最后染色时感觉膜表面油乎乎的，染色液很难均匀涂在表面。 |
10楼2011-08-10 12:35:32
