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空蓝Y劫

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[求助] westen blot 转膜

做westen blot 时转膜结束后硝酸纤维素膜上未见预染的Marker 条带，翻看滤纸上也没见任何颜色，是出什么问题了嘛？
我用的是200mA,1H,，放置时黑色板朝向黑面，没放错。

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1楼 2011-08-09 14:27:54

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空蓝Y劫

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silicare(金币+5): 鼓励交流 2011-10-24 11:52:38

引用回帖:

9楼: Originally posted by dianaofyezi at 2011-08-09 17:51:54:
电泳的时候看到预染marker了么？

SDS-page电泳时的预染Marker，在胶上有清晰的显示，加样Buffer的痕迹也很明显。但转膜后就没见任何有颜色的东西了。求原因求指教啊

转硝酸纤维素膜时用的电流是200mA，1h，

硝酸纤维素膜在放到胶表面前是用甲醇浸泡10秒钟的，这点老师叮嘱过的，应是不容更改的。

转膜时我是在托水盘中做的转印三明治，所以气泡的干扰可以排除。

转膜后封闭，封闭后一抗，一抗后PBST，洗三遍，一洗后二抗，然后再PBST洗三次，然后去离子水冲一下，然后染色，结果是没东西啊，呈现的是一片模糊的蓝色。

以前做的时候有时候会见蓝色带在膜上，有时候也会没有，但不管有没有最后的结果总会出条带的，就是好与差得区别，但现在直接是不出条带了！！！

自我感觉转膜的嫌疑最大，但不能肯定。另最后染色时感觉膜表面油乎乎的，染色液很难均匀涂在表面。