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荧光定量PCR与普通PCR产物不一样？
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我做荧光定量PCR,用Oligo6 设计的基因引物，扩增片段长度为91bp, 扩增产物的Tm值79.9。我先用普通PCR进行扩增，扩增条件为94℃,5min; 94℃.30s, 60℃ 30s, 72℃ 30s; 35个循环； 72℃ 10min。扩增的产物电泳检测后发现有200多bp并且只有一条带（具体图没有拍下来）。但是我同样的引物在荧光定量pcr仪上扩增其溶解曲线的Tm值为79℃多一点，基本与我设计的一致。具体图见附件。（其中荧光定量的扩增条件与普通PCR不太一样，我是采用的Takara试剂盒说明书上的两步法）。请问这是怎么一回事？ 本人知道怎么发金币，请版主代劳发给前20位回答问题的虫友。 |
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