应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量PCR？
81/1返回列表
查看: 1439  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Axililiy

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】荧光定量PCR？ 已有7人参与

我做的荧光定量PCR,现在存在以下几个问题：
1、熔出曲线出峰的位置有点小，在78.5的位置上，我看好多文献上多都在85左右，我想问问：我这个是我的主峰嘛?会不会是引物二聚体，或者是比较小的非特异扩增啊？（我把跑出来的样品点板，我的产物163bp，和阴性对比，我也看不出来是不是我要的产物）
2、阴性也超高，所以我怀疑是不是我P出来的不是我要的产物啊？
3、其次就是做的标准曲线，分不开，低浓度的基本上都是同时出峰，这是什么原因引起的？
如下图：
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-07 19:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
眼看帖子沉了，帮顶
赞一下(1人) 回复此楼
坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~
2楼2010-09-08 09:17:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

onkelhero

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没做过 想做  路过
回复此楼
3楼2010-09-08 10:09:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mafang68

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
从你的溶解曲线看，引物的特异性不太好；
还有你的样品浓度太高，起峰在15-20个循环最好
赞一下(1人) 回复此楼
木虫啦，哈哈
4楼2010-09-08 10:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你说你阴性超高是什么意思，是阴性也有扩增么，还有，如果你低浓度的也分不开，再加上你说的假阳性，那我可以肯定你是污染了
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-09-08 10:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-09-08 10:15:38:
从你的溶解曲线看，引物的特异性不太好；
还有你的样品浓度太高，起峰在15-20个循环最好

我现在觉得不像是污染了，感觉好像是引物二聚体和产物分不开；或者是压根就是引物二聚体。这就是上面图里的阴性
赞一下(1人) 回复此楼
开心就好！
6楼2010-09-08 10:29:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先做个普通pcr电泳看看扩增条带咋样
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-09-08 13:55:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1，不管你的样本结果怎么样，只要阴性有峰，这个实验就不可信，要全盘否定

2，再做实验，确实是你的引物问题了 就换引物，否则不能排除是污染了模板

3，标准曲线，至少也要5个点，3重复，CT值太小了影响判断
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-09-08 14:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Axililiy 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +4 脱颖而出 2026-03-16 10/500 2026-03-18 20:59 by 脱颖而出
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 材料专硕英一数二306 +4 z1z2z3879 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:00 by 楤哥
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭