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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR与普通PCR产物不一样？
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yaomoon

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR与普通PCR产物不一样？

我做荧光定量PCR,用Oligo6 设计的基因引物，扩增片段长度为91bp, 扩增产物的Tm值79.9。我先用普通PCR进行扩增，扩增条件为94℃,5min; 94℃.30s, 60℃ 30s, 72℃ 30s; 35个循环； 72℃ 10min。扩增的产物电泳检测后发现有200多bp并且只有一条带（具体图没有拍下来）。但是我同样的引物在荧光定量pcr仪上扩增其溶解曲线的Tm值为79℃多一点，基本与我设计的一致。具体图见附件。（其中荧光定量的扩增条件与普通PCR不太一样，我是采用的Takara试剂盒说明书上的两步法）。请问这是怎么一回事？

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1楼 2011-07-24 08:33:13
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-24 19:28:10
yaomoon(金币+3): 谢谢您的回帖，我会再进行核对，并进一步比较Q-PCR和普通PCR的电泳结果。 2011-07-25 20:39:55
1.你设计的引物本来应该扩出91bp但你扩的产物是200多bp，并且从你的溶解曲线图上可以看出你设计的引物特异性非常好，所以请你确认你的原始模板信息是否完全正确。
2.既然你做普通PCR和q-pcr用的引物及模板是完全一样的，那么扩增的片段是完全一样的
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-07-24 10:06:58
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