应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 标准菌株建立荧光定量PCR的标准曲线
51/1返回列表
查看: 2589  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jennyxyz219

新虫 (初入文坛)

[求助] 标准菌株建立荧光定量PCR的标准曲线

现在实验进展到需要对混合的DNA进行某种细菌的定量，但是定量前涉及到要进行标准曲线的构建，因为实验室里也没有人做过该方面的，所以想问问各位，应该如何构建呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-23 09:55:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-07-25 08:15:10
我是这么理解的，你看有没有道理：基因组DNA的拷贝数基本是算不出来的（基因组太大了），你只能测出它的浓度。所以要建立标准曲线的话只能采用你说的第二个问题中的方案：把你的要扩增片段放到质粒里面去，并且有一点是确定的，重组质粒的浓度和拷贝数之间是可以换算的，这样通过对模板进行精确定量后就可以倍比稀释来做标准曲线了
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-07-24 15:13:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
jennyxyz219(金币+2): 有帮助 2011-07-24 14:54:37
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-25 08:14:58
既然要对某一种细菌进行定量，那标准曲线的模板一定是这种细菌的DNA；并且以定要先对标准品进行精确定量，比如你要知道他的精确浓度或者拷贝数，然后做梯度稀释。如果是要为了发文章，你还要先做一个干扰物测定实验，用相同量的混合DNA与不加这种菌的DNA做定量，看有没有干扰物来影响结果
赞一下(2人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-07-24 11:15:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jennyxyz219

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-24 11:15:11:
既然要对某一种细菌进行定量，那标准曲线的模板一定是这种细菌的DNA；并且以定要先对标准品进行精确定量，比如你要知道他的精确浓度或者拷贝数，然后做梯度稀释。如果是要为了发文章，你还要先做一个干扰物测定实 ...

那么我想请问下，
问题一：我现在有大肠杆菌的标准菌株ATCC25922，我可以通过摇菌增殖，然后提取里面的DNA，再用分光光度计来检测它的浓度，可是我要该怎么来确定它的拷贝数呢，它的浓度和拷贝数之间有没有公式进行换算的呢？  
问题二：我看很过荧光定量PCR进行绝对定量的时候是要求建立标准曲线，而这个标准曲线是通过将目标序列整合到质粒进去，然后通过提取质粒的DNA，在进行浓度和拷贝数的转换，那么我这个是否也需要构建质粒，然后提取质粒，然后再进行标准曲线构建呢？
希望能够给我回复，我因为这个问题，已经困扰了很久了！谢谢您的帮助
赞一下 回复此楼
3楼2011-07-24 14:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jennyxyz219

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-24 15:13:32:
我是这么理解的，你看有没有道理：基因组DNA的拷贝数基本是算不出来的（基因组太大了），你只能测出它的浓度。所以要建立标准曲线的话只能采用你说的第二个问题中的方案：把你的要扩增片段放到质粒里面去，并且有 ...

你说的确实是有道理的，我想应该是需要构建质粒的吧！多谢您的答复！
赞一下 回复此楼
5楼2011-07-24 20:40:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 有人投过CCC中国控制会议吗？ 19+3 初九凡 2026-04-26 4/200 2026-05-02 21:11 by Equinoxhua
[考博] 考博 +4 Eternitf 2026-04-29 4/200 2026-05-02 16:10 by yejenny
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 16:06 by zahslv263y
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:51 by zahslv263y
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:51 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:36 by zahslv263y
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:06 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:06 by zahslv263y
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 3/150 2026-05-02 10:21 by ovidyohpyz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-02 10:21 by ovidyohpyz
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-02 10:06 by ovidyohpyz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 3/150 2026-05-02 09:36 by dz7y1p1i98
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 5/250 2026-05-02 09:21 by dz7y1p1i98
[考博] 药化及相关博士的申请 5+3 中药学渣 2026-04-29 3/150 2026-05-01 18:14 by babero
[论文投稿] 一篇MDPI论文改变了学习工作和生活 +3 helsinglee 2026-04-29 4/200 2026-05-01 11:45 by bobvan
[有机交流] 一个化合物的合成路线：CAS:367929-02-0 名称：8β-乙烯基雌二醇 50+4 zhquanbing 2026-04-28 4/200 2026-04-30 22:45 by zyqchem
[文学芳草园] 太白金星有点烦 +3 yexuqing 2026-04-27 3/150 2026-04-30 21:56 by myrtle
[考博] 中国地质大学（北京）博士招生补录，数理学院材料科学与工程专业和材料与化工专业 +3 liuxh329 2026-04-29 3/150 2026-04-30 15:42 by 顺利毕业zs
[基金申请] 收到国自然专家邀请后几年才会有本子送过来评 +3 barley5 2026-04-30 3/150 2026-04-30 14:58 by aspect3000
[论文投稿] 有没有快的中文核心比较快录用的，纳米材料光催化 5+3 2914439618 2026-04-27 4/200 2026-04-29 08:59 by 北京莱茵润色
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭