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happywoheni

铁虫 (小有名气)

[求助] pcr产物测序问题

前两天把pcr产物送去测序了,只有上下游引物没有测出来,比目的基因少了几十bp,这样得到的序列有用吗?是不是要进行下一步连接转化后再测序更好?
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12zhangwei

新虫 (小有名气)

要是做表达那一定要知道全长喽,一般引物后30-50bp测的不准确所以连接载体用载体引物测序
9楼2011-07-22 20:41:28
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查看全部 11 个回答

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
happywoheni(金币+1): 2011-07-22 12:35:53
西瓜(金币+2): good 2011-07-22 16:51:53
测PCR产物不是上下游引物没测出来而是测不出来,如果你对当前的测序原理懂的话就知道为什么测不出来了,如果想得到全序列的信息必须要连到载体上,让后从载体上找引物来测,所以连转这一步是绝对有必要的
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-07-22 12:28:06
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-07-22 16:52:07
(1)请公司重测,无需缴费。
(2)请查看是否只是下游引物未测出来,上游有可能是非特异结合(即序列与你的引物序列仅有1个甚至几个碱基的差别)
3楼2011-07-22 12:30:03
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

你的引物设计在什么位置?
4楼2011-07-22 12:32:04
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