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这胶是怎么了？小女子求解
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聚丙烯酰胺凝胶，DNA。问题： 1 这么窄的泳道，好不好，我看好多人发的论文都是宽泳道，而且这板子上样量好小，我上到3微升就有可能溢出来。 2 为什么染色，背景色不均匀。可否列举尽可能多的原因，我再一一排除。 3 4条比较清楚的都是DL2000MARKER,为什么染色时，marker总是比样品的条带显现快 小女子这厢先谢过啦(*^__^*) 嘻嘻  |
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 【分子生物】EPI帖 |
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anlewo7777
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2楼2011-07-20 22:32:05
空谷幽风
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【答案】应助回帖
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西瓜(金币+5, EPI+1): Good！跟沙发发表的时间间隔不到1分钟呢，呵呵~ 2011-07-21 11:42:15
墨池(金币+1): 2011-07-21 21:03:03
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！跟沙发发表的时间间隔不到1分钟呢，呵呵~ 2011-07-21 11:42:15
墨池(金币+1): 2011-07-21 21:03:03
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（1）关于发论文是用宽泳道还是窄泳道的图片我不太清楚，不过泳道越宽，通量越小，如果你一块胶上必须要点这么多样的话你用宽泳道来跑估计不够吧 （2）关于背景颜色不一致，这是与你样品的浓度来决定的，上样量越大（是质量不是体积），条带颜色越深，背景也就相应的颜色越深，有了这次的经验，下次上样的时候你可以适当调整不同样品的上样量，那么背景就颜色就比较一致了 （3）mark的条带浓度比较大，所以会在显色的时候最先出现，原理同（2） |
3楼2011-07-20 22:32:50
空谷幽风
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4楼2011-07-20 23:00:19
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anlewo7777
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【答案】应助回帖
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墨池(金币+1): 2011-07-21 22:02:58
dhd997(金币+5): good 2011-07-22 08:19:37
墨池(金币+1): 2011-07-21 22:02:58
dhd997(金币+5): good 2011-07-22 08:19:37
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同一泳道内背景染色有深有浅，这里的背景是你的PCR体系非特异扩增产生的，那里有了一定量的DNA，而且在大小上是连续的，颜色深浅代表了DNA量的不一样；Ta值我指的是变性温度，你做的可能是随机引物在基因组里的扩增，用的变性温度比较低，所以扩增不特异；我说你的模板可能有点多，是以我自己的经验来的，依据是扩增不特异，你可以在数量级的水平上减少模板量，看看所谓的‘背景“是否会变轻，可能图会漂亮些。 另，空谷虫友所说的通量在这里我理解是一块胶可以上样的数量的多少 |
7楼2011-07-21 21:52:47
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【答案】应助回帖
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墨池(金币+1): 2011-07-21 22:00:43
dhd997(金币+5): good 2011-07-22 08:19:48
墨池(金币+1): 2011-07-21 22:00:43
dhd997(金币+5): good 2011-07-22 08:19:48
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1 这么窄的泳道，好不好，我看好多人发的论文都是宽泳道，而且这板子上样量好小，我上到3微升就有可能溢出来。 你是用的长城齿梳子吧，可以选宽的试试，但是感觉这不是重点。 2 为什么染色，背景色不均匀。可否列举尽可能多的原因，我再一一排除。 染色后背景色不均匀的问题，可能原因：1 玻璃板没有洗干净，玻璃板一定要洗干净，且用去离子水冲洗；2. PCR扩增体系不理想，导致非特异片段集中在上部，跑不下来；3. 染色时加入的显影液不匀或为摇晃(不会特别影响)。 3 4条比较清楚的都是DL2000MARKER,为什么染色时，marker总是比样品的条带显现快 PCR产物上样量太少，结合的阴离子就少，显影肯定就慢且不明显。 建议跟实验室的师姐、师兄多学学，我也正在学习中，祝顺利。 |
8楼2011-07-21 21:55:32
9楼2011-07-21 22:02:22
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