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墨池

银虫 (小有名气)

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[求助] 这胶是怎么了？小女子求解

聚丙烯酰胺凝胶，DNA。问题：
1 这么窄的泳道，好不好，我看好多人发的论文都是宽泳道，而且这板子上样量好小，我上到3微升就有可能溢出来。
2 为什么染色，背景色不均匀。可否列举尽可能多的原因，我再一一排除。
3 4条比较清楚的都是DL2000MARKER,为什么染色时，marker总是比样品的条带显现快

小女子这厢先谢过啦(*^__^*) 嘻嘻

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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！

1楼 2011-07-20 22:17:36

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anlewo7777

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): good！ 2011-07-21 11:40:09
西瓜(金币+2, EPI+1): 补上 2011-07-21 11:40:50
墨池(金币+1): 2011-07-21 21:02:55

选宽还是窄泳道，是看你需要不需要将所有的样品呈现在一张图上，如果希望所有的样品都显现的话，就用窄的泳道；背景颜色深浅不一，和你扩增的结果差别大有关，需要你优化扩增的体系，在我看来，你的模板量可能有点多，扩增的Ta值选的不好；染色时，marker显色快，是因为它其中的条带浓度大且集中。

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2楼2011-07-20 22:32:05

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anlewo7777

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
墨池(金币+1): 2011-07-21 22:02:58
dhd997(金币+5): good 2011-07-22 08:19:37

同一泳道内背景染色有深有浅，这里的背景是你的PCR体系非特异扩增产生的，那里有了一定量的DNA，而且在大小上是连续的，颜色深浅代表了DNA量的不一样；Ta值我指的是变性温度，你做的可能是随机引物在基因组里的扩增，用的变性温度比较低，所以扩增不特异；我说你的模板可能有点多，是以我自己的经验来的，依据是扩增不特异，你可以在数量级的水平上减少模板量，看看所谓的‘背景“是否会变轻，可能图会漂亮些。
另，空谷虫友所说的通量在这里我理解是一块胶可以上样的数量的多少

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7楼2011-07-21 21:52:47

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