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墨池

银虫 (小有名气)

[求助] 这胶是怎么了？小女子求解

聚丙烯酰胺凝胶，DNA。问题：
1   这么窄的泳道，好不好，我看好多人发的论文都是宽泳道，而且这板子上样量好小，我上到3微升就有可能溢出来。
2    为什么染色，背景色不均匀。可否列举尽可能多的原因，我再一一排除。
3     4条比较清楚的都是DL2000MARKER,为什么染色时，marker总是比样品的条带显现快

小女子这厢先谢过啦(*^__^*) 嘻嘻
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
1楼 2011-07-20 22:17:36
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墨池

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-07-20 22:32:05:
选宽还是窄泳道，是看你需要不需要将所有的样品呈现在一张图上，如果希望所有的样品都显现的话，就用窄的泳道；背景颜色深浅不一，和你扩增的结果差别大有关，需要你优化扩增的体系，在我看来，你的模板量可能有点 ...

可能没理解，同一个泳道，为什么上边深，下边浅。。。看清了，是同一个泳道。
Ta值是什么？我这是srap，用的标准扩增程序，没改变什么。
从哪里可以看到我模板量有点多？求解。我上了2微升样品，1微升buffer.
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
5楼2011-07-21 21:10:56
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): good！ 2011-07-21 11:40:09
西瓜(金币+2, EPI+1): 补上 2011-07-21 11:40:50
墨池(金币+1): 2011-07-21 21:02:55
选宽还是窄泳道，是看你需要不需要将所有的样品呈现在一张图上，如果希望所有的样品都显现的话，就用窄的泳道；背景颜色深浅不一，和你扩增的结果差别大有关，需要你优化扩增的体系，在我看来，你的模板量可能有点多，扩增的Ta值选的不好；染色时，marker显色快，是因为它其中的条带浓度大且集中。
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2楼2011-07-20 22:32:05
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！跟沙发发表的时间间隔不到1分钟呢，呵呵~ 2011-07-21 11:42:15
墨池(金币+1): 2011-07-21 21:03:03
（1）关于发论文是用宽泳道还是窄泳道的图片我不太清楚，不过泳道越宽，通量越小，如果你一块胶上必须要点这么多样的话你用宽泳道来跑估计不够吧
（2）关于背景颜色不一致，这是与你样品的浓度来决定的，上样量越大（是质量不是体积），条带颜色越深，背景也就相应的颜色越深，有了这次的经验，下次上样的时候你可以适当调整不同样品的上样量，那么背景就颜色就比较一致了
（3）mark的条带浓度比较大，所以会在显色的时候最先出现，原理同（2）
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3楼2011-07-20 22:32:50
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-07-20 22:32:05:
选宽还是窄泳道，是看你需要不需要将所有的样品呈现在一张图上，如果希望所有的样品都显现的话，就用窄的泳道；背景颜色深浅不一，和你扩增的结果差别大有关，需要你优化扩增的体系，在我看来，你的模板量可能有点 ...

英雄所见略同，呵呵
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-07-20 23:00:19
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