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墨池

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-07-21 21:52:47:
同一泳道内背景染色有深有浅,这里的背景是你的PCR体系非特异扩增产生的,那里有了一定量的DNA,而且在大小上是连续的,颜色深浅代表了DNA量的不一样;Ta值我指的是变性温度,你做的可能是随机引物在基因组里的扩 ...

兄台错矣~srap标记是公布的引物,通用的。
阳光暖暖的,心情暖暖的,努力做个精致的女人!
11楼2011-07-21 22:03:35
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墨池

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-07-21 21:52:47:
同一泳道内背景染色有深有浅,这里的背景是你的PCR体系非特异扩增产生的,那里有了一定量的DNA,而且在大小上是连续的,颜色深浅代表了DNA量的不一样;Ta值我指的是变性温度,你做的可能是随机引物在基因组里的扩 ...

数量级水平上减少模板,怎么个数量级?我上了80ng/25微升体系,哈哈哈
阳光暖暖的,心情暖暖的,努力做个精致的女人!
12楼2011-07-21 22:06:00
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墨池

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-07-21 21:52:47:
同一泳道内背景染色有深有浅,这里的背景是你的PCR体系非特异扩增产生的,那里有了一定量的DNA,而且在大小上是连续的,颜色深浅代表了DNA量的不一样;Ta值我指的是变性温度,你做的可能是随机引物在基因组里的扩 ...

又忘了说,哈哈,我就这毛病。
SRAP-PCR反应在EDC-810型基因扩增仪(东胜创新生物科技有限公司)上进行,混样后采用复性变温法:94℃预变性5min;5个循环,94℃变性1min,35℃复性1 min,72℃延伸1min;35个循环,94℃变性1min,50℃复性1 min,72℃延伸1min;72℃延伸10min;4℃保存。

94度还低么?
阳光暖暖的,心情暖暖的,努力做个精致的女人!
13楼2011-07-21 22:09:07
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不好意思,是复性温度
14楼2011-07-21 22:12:41
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good! 2011-07-22 12:12:53
只是建议试一下,不一定有用,你把模板倍数稀释之后再用做模板加入体系。
15楼2011-07-21 22:16:48
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-21 21:16:24:
1 通量是虾米意思?
2 为虾米同一个泳道,上边背景色深,下边背景色浅,这应该跟上样量没关系了吧(*^__^*) 嘻嘻

谢谢

7楼得解释很详细,看他的解释就好了
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
16楼2011-07-22 08:49:25
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墨池

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-07-21 22:12:41:
不好意思,是复性温度

复性温度35度,老外做的标准的扩增程序
阳光暖暖的,心情暖暖的,努力做个精致的女人!
17楼2011-07-22 13:47:59
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godsmiler

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-20 22:17:36:
聚丙烯酰胺凝胶,DNA。问题:
1   这么窄的泳道,好不好,我看好多人发的论文都是宽泳道,而且这板子上样量好小,我上到3微升就有可能溢出来。
2    为什么染色,背景色不均匀。可否列举尽可能多的原因,我再一 ...

楼主遇到的情况有:Maker显色快。
  请问有没有遇到过Maker比其他样品跑得快的情况?(最近做的DNA变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,EB染色。寡核苷酸直接做样,跑了好几次,都是这种情况,并且样品条带不单一,另有一个奇怪地现象是在这些条带中,目的条带亮度有时弱有时强,影响下游实验。也反馈到合成公司,二次合成后,跑胶结果没有变化。。。)
  
18楼2011-07-22 17:31:34
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墨池

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by godsmiler at 2011-07-22 17:31:34:
楼主遇到的情况有:Maker显色快。
  请问有没有遇到过Maker比其他样品跑得快的情况?(最近做的DNA变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,EB染色。寡核苷酸直接做样,跑了好几次,都是这种情况,并且样品条带不单一,另有一 ...

marker和其他样品跑的速度的比对,我们没做,我们上marker主要是看自己的目的片段有多大
阳光暖暖的,心情暖暖的,努力做个精致的女人!
19楼2011-07-22 20:25:53
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bluysky0902

金虫 (正式写手)

请问下,你做的胶是变性的还是非变性的,我做非变性时,染色震荡过程、取出来照相的过程中,很容易把胶给弄破了,请问你是怎样做的?谢谢
20楼2011-09-19 17:21:15
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