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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何进一步纯化这个蛋白？
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blueghost006

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何进一步纯化这个蛋白？

最近在纯化一个蛋白~~但是总是会有杂带啊~~~~不知道有什么方法可以将那些讨厌的杂带给弄掉~~~~另外，我纯化出来去打抗体的~~~不知道就以这样的水平可以打么？PS：最亮的是我的目的条带~~~~
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1楼2011-07-16 10:29:06
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是你的蛋白既有聚集又有降解啊？你跑sds胶上样buffer里有dtt吗？
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8楼2013-05-23 09:44:50
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zhougama

禁虫 (正式写手)
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2楼2011-07-16 15:00:04
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以利用TAP技术进行蛋白纯化，你搜下网上很多介绍的
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3楼2011-07-16 15:52:36
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blueghost006

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhougama at 2011-07-16 15:00:04:
你总得简单介绍下你的纯化方法以及你这种蛋白质的某些性质吧，不然我们如何知道！

我的那个蛋白是一个全蛋白的N端，与Trx融合，PET32作为载体，在BL21中表达，然后过Ni柱，先用6M~1M的尿素复性，然后用咪唑洗脱，先用20mM的PH=7.5的咪唑洗脱，再用20mM/PH=6.0咪唑洗脱，最后用500mM/PH=8.0的咪唑洗下目的蛋白，不知道各位大虾有什么意见？
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4楼2011-07-17 13:27:39
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