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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有人提取过PET-28a的质粒吗？
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[求助] 有人提取过PET-28a的质粒吗？

我最近用质粒小提试剂盒提取了一下PET-28a的质粒，DNA电泳鉴定  却没有条带，没有提取出来~有没有谁提过这个质粒啊  有没有什么技巧或方法 可以提取出来啊
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1楼 2011-07-08 16:21:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！Kan浓度用多少呢？送佛送到西嘛。 2011-07-08 19:10:28
chunmeiyang(金币+1): 2011-07-09 09:33:32
西瓜(金币+1): 9楼补充上了。一并授予EPI！ 2011-07-09 11:29:04
经常提的，很好提的呀。接种的时候记得加Kan，给点抗性压力，省得质粒丢失，原来都是自己配试剂提取，现在提取的方法就是用Axygen或者Sangon的质粒提取试剂盒，不到二十分钟就能完成，质量可以的。
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3楼2011-07-08 18:13:56
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普通回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-07-08 19:09:42
chunmeiyang(金币+1): 2011-07-09 09:33:27
不知道菌有没有在相应抗性板子上长？如果长的不错的话，你没有提出质粒，那应该是你没有提取出来。。。

重新再提吧。。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-07-08 18:10:01
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-08 18:13:56:
经常提的，很好提的呀。接种的时候记得加Kan，给点抗性压力，省得质粒丢失，原来都是自己配试剂提取，现在提取的方法就是用Axygen或者Sangon的质粒提取试剂盒，不到二十分钟就能完成，质量可以的。

那你们别的质粒也是用这中试剂盒提的吗？还是只是PET-28a用这种试剂盒啊
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4楼2011-07-08 20:23:35
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cxcx1013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-09 08:00:59
chunmeiyang(金币+1): 2011-07-09 09:33:36
今天还提啦，没什么大问题，pET28质粒拷贝数是比较低，但是适当提高一下菌量，用一般的试剂盒都没问题。。
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5楼2011-07-08 20:42:15
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yixinyuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-09 08:01:08
chunmeiyang(金币+1): 2011-07-09 09:33:41
接菌时加Kan至终浓度50vg/ml，pET28这种低拷贝数质粒，应适当增加菌量提取，一般质粒抽提试剂盒都可以一小时内完成
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6楼2011-07-08 21:31:30
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by cxcx1013 at 2011-07-08 20:42:15:
今天还提啦，没什么大问题，pET28质粒拷贝数是比较低，但是适当提高一下菌量，用一般的试剂盒都没问题。。

你一般用几ml 菌液提的啊
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7楼2011-07-08 22:28:52
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-09 08:01:22
chunmeiyang(金币+1): 2011-07-09 09:33:45
50ml离心管5ml装液量，过夜摇菌，取1.5ml离心，E.Z.N.A.Omega质粒提取试剂盒。相当好用~
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8楼2011-07-08 22:53:44
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-09 08:01:34
引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2011-07-08 20:23:35:
那你们别的质粒也是用这中试剂盒提的吗？还是只是PET-28a用这种试剂盒啊

别的质粒也用同样的试剂盒的，提pET28等表达载体时培养过夜的菌液2-3ml也足够了，另外Kan的浓度为50ug/ml。
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9楼2011-07-08 23:18:04
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-07-08 22:53:44:
50ml离心管5ml装液量，过夜摇菌，取1.5ml离心，E.Z.N.A.Omega质粒提取试剂盒。相当好用~

我们用的TIANGEN的试剂盒，你们用过吗？不知道这个跟试剂盒有没有关系
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10楼2011-07-09 09:35:09
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