应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒是否需要酶切后再电泳？
31/1返回列表
查看: 3442  |  回复: 9
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 质粒是否需要酶切后再电泳？ 已有5人参与

将连接有目的片段的质粒做双酶切，跑电泳的时候想加一个空质粒，那这个空质粒是不是应该先单酶切一下啊？不然跑出来的不是线性的话就和前面双酶切的就没有可比性了啊？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-04 21:15:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-07-05 08:00:19
如果是同尾酶，那么用A和B切外源片段，用A和C切载体，连接之后克隆子的酶切位点变为A和D，B和C切口连接之后变为D的位点？
赞一下(2人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-07-05 01:05:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5, EPI+1): 辛苦，一并奖励了 2011-07-05 19:16:27
我现在只是把目的片段连接到了pMD19-T载体上，还没做到双酶切重组质粒这一步，我现在就想把目的片段从pMD19-T载体上切下来，切完之后跑胶需不需要加一个空载体做对照啊？

原来是TA克隆，目的是看有没有连接上外源片段。你没有必要双酶切那么费事的，单酶切就可以了。你这样做是需要加一个对照的，对照应该为空载体，选用的酶切位点最好是外源片段上没有的位点，同时在载体上只有一个位点，这样切出来无论是有没有带有外源片段，都是一条带，但是带有外源片段的质粒条带会大于不带外源片段的质粒。

如果是只在外源片段上有但是载体上没有的位点，那么如果酶失效了，或者其它原因导致酶切不成功，那么质粒就不被切开，判断起来就稍微麻烦了些。


还有一个问题是我才发现pMD19-T载体在TA克隆位点后居然有我的下游引物的酶切位点BamHI 这样会不会影响酶切啊？最后双酶切以后会是3条带吗？

不一定是三条带，如果两个位点之间相隔很近，那么切出来的条带会很短，跑胶的时候会跑出去根本看不见，毕竟在多克隆位点处的酶切位点是很密集的。你选用的鉴别方法可以再仔细考虑一下，包括单酶切还是双酶切，选用什么酶。
赞一下(2人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-07-05 18:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 friya0910 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭