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ybQuan金虫 (著名写手)
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关于DNA提取的问题 已有6人参与
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在提取昆虫DNA的时候，裂解液中加入一定的蛋白酶K，消化结束后加入醋酸甲沉淀杂质，然后用异丙醇沉淀DNA 我像我问的是：消化完后蛋白酶K要不要处理一下？有没有必要？ 百度里有人说要95°灭火15min，蛋白酶K对DNA质量有什么影响?如果95°灭火，那做PCR的时候预变性时候不是就可以了吗？ |
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2楼2011-06-21 17:48:39
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我们是用PCR仪当水浴锅而已……95度灭活是你提取DNA的最后一步，灭活之后的DNA可以存起来也可以直接进行后续的PCR实验。 我们做的是线虫，蛋白酶K处理之后再灭活蛋白酶，就可以直接作为PCR模板了，跟你们的材料不一样，方法也不一样。 我们沉淀DNA的方法跟你的差不多，只不过没用在这里。样品量大的话，可以用苯酚氯仿抽提。不过方法是越简单越好，你可以按原方法提取之后进行PCR，如果有问题，再加一步95度15分钟灭活蛋白酶K就好了，之后再进行PCR。 不要把灭活这步当成预变性直接PCR，首先蛋白酶K没灭活之前会降解Taq酶，其次95度15分钟的条件对Taq酶的活性破坏也很大。 |
6楼2011-06-22 15:17:12
ybQuan
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