应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于DNA提取的问题
51/1返回列表
查看: 1925  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ybQuan

金虫 (著名写手)

[交流] 关于DNA提取的问题 已有6人参与

在提取昆虫DNA的时候，裂解液中加入一定的蛋白酶K，消化结束后加入醋酸甲沉淀杂质，然后用异丙醇沉淀DNA
我像我问的是：消化完后蛋白酶K要不要处理一下？有没有必要？
百度里有人说要95°灭火15min，蛋白酶K对DNA质量有什么影响?如果95°灭火，那做PCR的时候预变性时候不是就可以了吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
哥在江湖漂，很少不挨刀，不是愿意挨，是哥很无奈!
1楼 2011-06-21 15:09:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by ybQuan at 2011-06-22 13:12:01:
你是说在PCR反应后延伸完了，再95°灭活吗？
醋酸钾沉淀杂质后上清再加无水乙醇就可以直接沉淀DNA的，你们用什么抽提？

我们是用PCR仪当水浴锅而已……95度灭活是你提取DNA的最后一步，灭活之后的DNA可以存起来也可以直接进行后续的PCR实验。

我们做的是线虫，蛋白酶K处理之后再灭活蛋白酶，就可以直接作为PCR模板了，跟你们的材料不一样，方法也不一样。

我们沉淀DNA的方法跟你的差不多，只不过没用在这里。样品量大的话，可以用苯酚氯仿抽提。不过方法是越简单越好，你可以按原方法提取之后进行PCR，如果有问题，再加一步95度15分钟灭活蛋白酶K就好了，之后再进行PCR。

不要把灭活这步当成预变性直接PCR，首先蛋白酶K没灭活之前会降解Taq酶，其次95度15分钟的条件对Taq酶的活性破坏也很大。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-22 15:17:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

yuxia82012

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone: 不停组织或样本 提取方法有点差异 2011-06-21 18:40:36
不用苯酚氯仿抽提的吗？没提过昆虫的，但是我们提链霉菌中DNA都是需要这个得
赞一下(2人) 回复此楼
在等待中涅槃重生
2楼2011-06-21 17:48:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
如果不灭活，蛋白酶K会影响后续的PCR反应（Taq酶也是蛋白），但对DNA应该没有影响。不过从保存的角度来说，东西越纯越好保存，还是去掉蛋白酶K的好。
从你说的方法来看，没有抽提的步骤，蛋白酶K可能除不尽，建议还是灭活更保险。
我们也是用蛋白酶K消化样品，用PCR仪做，最后是95度15分钟灭活，还是挺方便的。
PCR预变性一般用不了15分钟这么久吧，我们一般是5分钟甚至2分钟。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-21 21:38:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
都是用的试剂盒。用的都连原理都不清楚了~~~~
补习一下基础知识。帮楼主顶。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-21 22:34:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭