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xuexue1204

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR引物扩增的问题

我有一段基因经普通PCR扩增后是400多bp。同时,也用实时荧光定量PCR中与探针匹配的引物进行了普通PCR,此PCR扩增的片段是200在250bp之间,为什么两对引物扩增的片段大小不一样呢?

问题补充:普通PCR的引物与荧光PCR的引物是不一样的。

还请大虾们指点一二,不胜感激。
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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xuexue1204(金币+3): 明白了,自己懂得还是太少了,谢谢啊 2011-06-11 21:31:11
lstt09nk(金币+5): 鼓励 2011-06-12 19:07:13
你的基因有400多bp吧,当然你用来扩增基因的引物必须是全长引物,否则你得不到目的基因。至于荧光定量PCR引物,它不需要扩增得到全长,只需要在某个模版扩增得到唯一特异的条带就可以了。至于为什么是扩增出200-250bp,请参见荧光定量引物的设计原则。
不知道解释清楚了没,呵呵
3楼2011-06-11 14:45:30
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love_st

金虫 (著名写手)


什么意思啊?您的引物不一样扩增长度不一致,那你看两个引物位置在哪儿啊

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2楼2011-06-11 08:32:53
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xuexue1204

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-06-11 08:32:53:
什么意思啊?您的引物不一样扩增长度不一致,那你看两个引物位置在哪儿啊

就是想更简单的知道是为什么,二楼的解释就很好了,不过也谢谢你
共同学习,共同进步,共同提高,加油!
4楼2011-06-11 21:35:36
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 感谢参与 2011-06-12 19:07:31
xuexue1204(金币+1): 谢谢,太高兴了,有这么多热心人 2011-06-13 20:28:48
xuexue1204(金币+1): 2011-06-13 20:29:41
随便找个软件比如NTI打开你的序列,看看你的两对引物都在什么位置就清楚了。REAL TIME PCR的引物不需要是全长,只要包括你的探针互补序列即可。
摒气动方息,宁神心自明。
5楼2011-06-12 07:59:30
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