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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR引物扩增的问题
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xuexue1204

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR引物扩增的问题

我有一段基因经普通PCR扩增后是400多bp。同时，也用实时荧光定量PCR中与探针匹配的引物进行了普通PCR,此PCR扩增的片段是200在250bp之间，为什么两对引物扩增的片段大小不一样呢？

问题补充：普通PCR的引物与荧光PCR的引物是不一样的。

还请大虾们指点一二，不胜感激。
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xuexue1204

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1楼 2011-06-10 23:05:19
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love_st

金虫 (著名写手)
什么意思啊？您的引物不一样扩增长度不一致，那你看两个引物位置在哪儿啊
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xuexue1204
2楼2011-06-11 08:32:53
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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xuexue1204(金币+3): 明白了，自己懂得还是太少了，谢谢啊 2011-06-11 21:31:11
lstt09nk(金币+5): 鼓励 2011-06-12 19:07:13
你的基因有400多bp吧，当然你用来扩增基因的引物必须是全长引物，否则你得不到目的基因。至于荧光定量PCR引物，它不需要扩增得到全长，只需要在某个模版扩增得到唯一特异的条带就可以了。至于为什么是扩增出200-250bp，请参见荧光定量引物的设计原则。
不知道解释清楚了没，呵呵
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3楼2011-06-11 14:45:30
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xuexue1204

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-06-11 08:32:53:
什么意思啊？您的引物不一样扩增长度不一致，那你看两个引物位置在哪儿啊

就是想更简单的知道是为什么，二楼的解释就很好了，不过也谢谢你
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4楼2011-06-11 21:35:36
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 感谢参与 2011-06-12 19:07:31
xuexue1204(金币+1): 谢谢，太高兴了，有这么多热心人 2011-06-13 20:28:48
xuexue1204(金币+1): 2011-06-13 20:29:41
随便找个软件比如NTI打开你的序列，看看你的两对引物都在什么位置就清楚了。REAL TIME PCR的引物不需要是全长，只要包括你的探针互补序列即可。
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摒气动方息，宁神心自明。
5楼2011-06-12 07:59:30
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xuexue1204

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
谢谢你，热心人好多呀
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共同学习，共同进步，共同提高，加油！
6楼2011-06-13 20:30:13
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