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475502411

铜虫 (著名写手)

[求助] 电转化的问题

pGEM-T Easy的重组质粒，大约是3.7KB，能不能通过电专转化到任意临床分离菌中（大肠杆菌），谢谢各位大侠指教！！！！！
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
1楼 2011-06-10 08:44:59
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-10 11:14:23
这个当然可以的。。。
只要你把大肠杆菌的感受态细胞做好，细胞效率高就没有什么问题。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-06-10 09:31:25
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wzwhq

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-10 11:14:33
475502411(金币+1): 2011-06-12 19:17:07
大肠杆菌是阴性菌，细胞壁薄，用热激法转化就行，当然电转化效率会更高的
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3楼2011-06-10 10:59:27
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
肯定可以的，找个大肠杆菌感受态制作方法。
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仕不可不弘毅，任重而道远
4楼2011-06-10 17:41:04
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啮风

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 有道理 2011-06-11 03:43:17
475502411(金币+5): 2011-06-12 19:07:37
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-06-10 08:44:59:
pGEM-T Easy的重组质粒，大约是3.7KB，能不能通过电专转化到任意临床分离菌中（大肠杆菌），谢谢各位大侠指教！！！！！

这个肯定不行的，因为野生菌株里面的限制内切酶系统，很容易切掉外来DNA的，所以一般克隆或者表达用的大肠杆菌，都是人工修饰过的。
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5楼2011-06-10 21:34:55
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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

475502411(金币+1): 2011-06-12 19:17:51
临床分离菌？
楼上的建议很不错
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6楼2011-06-11 08:40:31
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 啮风 at 2011-06-10 21:34:55:
这个肯定不行的，因为野生菌株里面的限制内切酶系统，很容易切掉外来DNA的，所以一般克隆或者表达用的大肠杆菌，都是人工修饰过的。

质粒点击转化这种方法还是可行的，不过这位童鞋说的是对的，不经人为筛选过的野生菌株确有去掉外源DNA的酶切系统。
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7楼2011-06-11 11:54:50
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

475502411(金币+2): 2011-06-12 19:11:40
4楼说的有道理，还有一个问题，就是每一质粒都有自己最好的宿主比如pET系统用的是BL21，其他宿主有可能转化不进去，在此补充一下。

不过4楼有点太确定了，我的意思是，可以大胆的试试！实验吗，理论都完美了就没有新的发现和进步了~~~~
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8楼2011-06-11 19:12:04
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 啮风 at 2011-06-10 21:34:55:
这个肯定不行的，因为野生菌株里面的限制内切酶系统，很容易切掉外来DNA的，所以一般克隆或者表达用的大肠杆菌，都是人工修饰过的。

但是实验需要，我见外文有蚊香是这样报道的，他们的实验叫complement experiment。就是将发生变异的基因重新连接到载体上，在转入存在变异的菌株，看基因变化对菌体的影响。那怎么办啊》？
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
9楼2011-06-12 19:11:10
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-06-11 19:12:04:
4楼说的有道理，还有一个问题，就是每一质粒都有自己最好的宿主比如pET系统用的是BL21，其他宿主有可能转化不进去，在此补充一下。

不过4楼有点太确定了，我的意思是，可以大胆的试试！实验吗，理论都完美了就 ...

恩，导师也是这样说的，说既然有报道肯定就事可行的。让我试试，但是我不知道是不是要把我的实验菌株做成感受态在惊醒电转化，还是直接转化？纠结，谢谢你啊！！！
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
10楼2011-06-12 19:13:32
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