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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 电转化的问题
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-06-10 09:31:25:
这个当然可以的。。。
只要你把大肠杆菌的感受态细胞做好，细胞效率高就没有什么问题。。。

谢谢你，你做过吗？我终于找到我实验设计的了。希望能指点一下，我有好多问题呢，谢谢诶，期待回复！！
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
11楼2011-06-12 19:16:17
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啮风

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-06-12 19:11:10:
但是实验需要，我见外文有蚊香是这样报道的，他们的实验叫complement experiment。就是将发生变异的基因重新连接到载体上，在转入存在变异的菌株，看基因变化对菌体的影响。那怎么办啊》？

complement experiment叫回复实验，一般是用来验证基因功能的，打个比方，你用随机突变的方法，得到很有意思的突变株，然后呢，你找到这个被突变的基因，这时候呢，你可以发一篇稍微低的文章，高一点的文章，会让你做complement experiment实验，就是你扩增得到一个完整的突变基因，然后转到突变株，如果这个基因是产生突变的主要原因，那么突变株应该恢复到野生株状态，当然啦，这是理想状态，一般很难做到一个很好的complement experiment，就得另想加数据了。
扯远了，回到你的问题，那么怎么将外源质粒转到细菌里，一个是接合（这个得看运气，不是所有野生菌株，都能接合成功，接合后的稳定也是很大问题），第二个就是电转，同样也面临这上述问题。
当然有文献支持，你成功的概率就比较大了。
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12楼2011-06-13 01:42:57
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 啮风 at 2011-06-13 01:42:57:
complement experiment叫回复实验，一般是用来验证基因功能的，打个比方，你用随机突变的方法，得到很有意思的突变株，然后呢，你找到这个被突变的基因，这时候呢，你可以发一篇稍微低的文章，高一点的文章，会 ...

谢谢你，假如说的的电转化成功了，怎么筛选啊？怎么确定哪个菌落是转化子啊？因为我的菌本身具有一定的耐药性！
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
13楼2011-06-13 08:30:51
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-06-12 19:16:17:
谢谢你，你做过吗？我终于找到我实验设计的了。希望能指点一下，我有好多问题呢，谢谢诶，期待回复！！

有什么问题可以PM我。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
14楼2011-06-13 09:14:16
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-06-13 09:14:16:
有什么问题可以PM我。

好的，谢谢！
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
15楼2011-06-13 13:08:10
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如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

475502411(金币+1): 2011-06-14 09:06:58
你说的“任意”范围太大 不确定性太多

5、8楼的建议可以！

大肠很好转的，反正你有抗性标记的，筛选也方便的。

就是制作感受态比较麻烦！
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生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
16楼2011-06-13 13:34:37
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gwbk

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-06-12 19:11:10:
但是实验需要，我见外文有蚊香是这样报道的，他们的实验叫complement experiment。就是将发生变异的基因重新连接到载体上，在转入存在变异的菌株，看基因变化对菌体的影响。那怎么办啊》？

反正都要做感受态的，~~~做完感受态可以选择电转或者化转，能做电转就做电转，效率高。不过电转化感受态细胞离子浓度不能高，否则会啪啪的电火花哦~~~
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17楼2011-06-13 15:13:29
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475502411

铜虫 (著名写手)
送鲜花一朵
谢谢大家对我的帮助，我有点思路了，明天开始做，有结果我会和分享的，再次感谢
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
18楼2011-06-14 09:08:28
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602059625

金虫 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by 啮风 at 2011-06-13 01:42:57:
complement experiment叫回复实验，一般是用来验证基因功能的，打个比方，你用随机突变的方法，得到很有意思的突变株，然后呢，你找到这个被突变的基因，这时候呢，你可以发一篇稍微低的文章，高一点的文章，会 ...

专家不常有，有就一定要收听
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[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
19楼2011-06-16 18:24:50
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