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475502411

铜虫 (著名写手)

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[求助] 电转化的问题

pGEM-T Easy的重组质粒，大约是3.7KB，能不能通过电专转化到任意临床分离菌中（大肠杆菌），谢谢各位大侠指教！！！！！

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475502411

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可以朝九晚五，也能浪迹天涯

1楼 2011-06-10 08:44:59

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啮风

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

Originally posted by 475502411 at 2011-06-12 19:11:10:
但是实验需要，我见外文有蚊香是这样报道的，他们的实验叫complement experiment。就是将发生变异的基因重新连接到载体上，在转入存在变异的菌株，看基因变化对菌体的影响。那怎么办啊》？

complement experiment叫回复实验，一般是用来验证基因功能的，打个比方，你用随机突变的方法，得到很有意思的突变株，然后呢，你找到这个被突变的基因，这时候呢，你可以发一篇稍微低的文章，高一点的文章，会让你做complement experiment实验，就是你扩增得到一个完整的突变基因，然后转到突变株，如果这个基因是产生突变的主要原因，那么突变株应该恢复到野生株状态，当然啦，这是理想状态，一般很难做到一个很好的complement experiment，就得另想加数据了。
扯远了，回到你的问题，那么怎么将外源质粒转到细菌里，一个是接合（这个得看运气，不是所有野生菌株，都能接合成功，接合后的稳定也是很大问题），第二个就是电转，同样也面临这上述问题。
当然有文献支持，你成功的概率就比较大了。