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xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] 和touchdownPCR有关的

本人在做PCR过程中，发现有几次P时，各种低的退火温度都试过，结果神马条带都没有，很干净 ，或者条带很弱，然后我就试着用touchdown作，结果条带挺不错的（都是同一批标本，同样的试剂），很奇怪不知道什么原理？？懂得的虫虫能不能帮我解释下？
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1楼 2011-06-03 17:52:07
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kidtt

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+5, EPI+1): 不错不错，初露锋芒啊！ 2011-06-03 21:53:40
xwsooo(金币+1): 2011-06-06 09:11:17
因为 touch down原理就在于，温度的升高提高了PCR扩增的特异性，但也提高了引物结合的难度，降低了扩增的效率，因此一开始先用高温扩增，保证扩增的严谨性，待目的基因的丰度上升后，降低扩增的温度，提高扩增的效率（此时非特异的位点由于丰度低，无法和特异位点竞争）。
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3楼2011-06-03 21:34:16
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
这就是touch的优点啊
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2楼2011-06-03 20:06:18
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螺旋技术

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 感谢分享 2011-06-05 22:46:39
xwsooo(金币+1): 2011-06-06 09:11:22
08  年nature procotol上有篇专门介绍TD PCR的文章，你下下来看看。。。。
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4楼2011-06-05 22:28:57
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bio-research

金虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
xwsooo(金币+1): 2011-06-06 09:11:28
Regular PCR is suitable for considerable accurate anealing temperature.
there is almost any bands in regular PCR because you didn`t use accurate anealing temperature.
and touchdown PCR can make up the weakness of Regular PCR, namely when you can`t master accurate temperature.
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5楼2011-06-05 23:11:42
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