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xwsooo

银虫 (小有名气)


[交流] 和touchdownPCR有关的

本人在做PCR过程中,发现有几次P时,各种低的退火温度都试过,结果神马条带都没有,很干净 ,或者条带很弱,然后我就试着用touchdown作,结果条带挺不错的(都是同一批标本,同样的试剂),很奇怪不知道什么原理??懂得的虫虫能不能帮我解释下?
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★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
这就是touch的优点啊
2楼2011-06-03 20:06:18
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kidtt

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): 不错不错,初露锋芒啊! 2011-06-03 21:53:40
xwsooo(金币+1): 2011-06-06 09:11:17
因为 touch down原理就在于,温度的升高提高了PCR扩增的特异性,但也提高了引物结合的难度,降低了扩增的效率,因此一开始先用高温扩增,保证扩增的严谨性,待目的基因的丰度上升后,降低扩增的温度,提高扩增的效率(此时非特异的位点由于丰度低,无法和特异位点竞争)。
3楼2011-06-03 21:34:16
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螺旋技术

新虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 感谢分享 2011-06-05 22:46:39
xwsooo(金币+1): 2011-06-06 09:11:22
08  年nature procotol上有篇专门介绍TD PCR的文章,你下下来看看。。。。
4楼2011-06-05 22:28:57
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bio-research

金虫 (职业作家)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
xwsooo(金币+1): 2011-06-06 09:11:28
Regular PCR is suitable for considerable accurate anealing temperature.
there is almost any bands in regular PCR because you didn`t use accurate anealing temperature.
and touchdown PCR can make up the weakness of Regular PCR, namely when you can`t master accurate temperature.
5楼2011-06-05 23:11:42
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xurong1127

新虫 (初入文坛)


★
xwsooo(金币+1): 谢谢参与
想问下你Touchdown怎么设置的啊,我也是普通PCR做不出,可Touchdown条带好弱
6楼2013-04-18 15:28:43
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