应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 想问下在以cDNA为模板时，PCR的结果却是徒步 什么原因
61/1返回列表
查看: 1496  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Lee_Py

银虫 (小有名气)

[求助] 想问下在以cDNA为模板时，PCR的结果却是徒步 什么原因

用内标P的结果就很好 说明不是CDNA的问题  但是为啥用自己的引物却P那么差 P的根marker一样
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-02 12:56:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-06-02 20:42:25
我最近做拼接PCR也是弥散带，把所有的东西都换了一遍，锁定引物和模版。我的模板质粒非常异常，超螺旋的部分亮度太亮了。引物有一个也是用了好久的。
说了半天，你的情况我觉得是cDNA浓度太高，或者你加的量过多了，不妨说详细点，大家研究研究
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-02 15:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lee_Py

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-06-02 15:29:51:
我最近做拼接PCR也是弥散带，把所有的东西都换了一遍，锁定引物和模版。我的模板质粒非常异常，超螺旋的部分亮度太亮了。引物有一个也是用了好久的。
说了半天，你的情况我觉得是cDNA浓度太高，或者你加的量过多 ...

嘿嘿 首先感谢下  但是我做了几个梯度  反转的cDNA我分别稀释了10倍、50倍、80倍、100倍 但是条带还是很弥散 那几个梯度P的结果都基本一样 稀释的模板我也都是加1ul 50的体系
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-02 17:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lee_Py

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-06-02 15:29:51:
我最近做拼接PCR也是弥散带，把所有的东西都换了一遍，锁定引物和模版。我的模板质粒非常异常，超螺旋的部分亮度太亮了。引物有一个也是用了好久的。
说了半天，你的情况我觉得是cDNA浓度太高，或者你加的量过多 ...

嘿嘿 首先感谢下  但是我做了几个梯度  反转的cDNA我分别稀释了10倍、50倍、80倍、100倍 但是条带还是很弥散 那几个梯度P的结果都基本一样 稀释的模板我也都是加1ul 50的体系
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-02 17:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-02 20:42:33
Lee_Py(金币+2): 2011-06-04 15:49:38
引用回帖:
Originally posted by Lee_Py at 2011-06-02 17:07:38:
嘿嘿 首先感谢下  但是我做了几个梯度  反转的cDNA我分别稀释了10倍、50倍、80倍、100倍 但是条带还是很弥散 那几个梯度P的结果都基本一样 稀释的模板我也都是加1ul 50的体系

引物特异性不好吧。
我以前P侧翼序列时。经常P出弥散带，就是真实PCR的反映。结果优化后能P出单一条带也是单引物自扩结果。

如果你一定要优化条件，可以用TOUCH DOWN。 就是退火逐步降低。我的经验是能筛到单一条带。但不保证是你要的目的条带。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-02 17:17:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

churchill87426

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-02 20:42:43
Lee_Py(金币+3): 2011-06-04 15:49:46
LZ 的目的条带多长啊？其实内标很好并不能说明cDNA好啊，我这段时间做的用国产试剂盒反转录就能出actin但是目的条带不出（目的条带2100bp）,后来换个进口反转录试剂盒，一次目的条带就出了，当然actin也出。 不知道LZ最后P出来目的条带没啊？
另外引物特异性问题，LZ可以用NCBI上blast一下，看看非特异性扩增多不多，如果不行就试一下改改引物。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-02 18:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Lee_Py 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 352求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123！
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭