应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 想问下在以cDNA为模板时，PCR的结果却是徒步 什么原因
61/1返回列表
查看: 1486  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Lee_Py

银虫 (小有名气)

[求助] 想问下在以cDNA为模板时，PCR的结果却是徒步 什么原因

用内标P的结果就很好 说明不是CDNA的问题  但是为啥用自己的引物却P那么差 P的根marker一样
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-02 12:56:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-06-02 20:42:25
我最近做拼接PCR也是弥散带，把所有的东西都换了一遍，锁定引物和模版。我的模板质粒非常异常，超螺旋的部分亮度太亮了。引物有一个也是用了好久的。
说了半天，你的情况我觉得是cDNA浓度太高，或者你加的量过多了，不妨说详细点，大家研究研究
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-02 15:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lee_Py

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-06-02 15:29:51:
我最近做拼接PCR也是弥散带，把所有的东西都换了一遍，锁定引物和模版。我的模板质粒非常异常，超螺旋的部分亮度太亮了。引物有一个也是用了好久的。
说了半天，你的情况我觉得是cDNA浓度太高，或者你加的量过多 ...

嘿嘿 首先感谢下  但是我做了几个梯度  反转的cDNA我分别稀释了10倍、50倍、80倍、100倍 但是条带还是很弥散 那几个梯度P的结果都基本一样 稀释的模板我也都是加1ul 50的体系
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-02 17:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lee_Py

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-06-02 15:29:51:
我最近做拼接PCR也是弥散带，把所有的东西都换了一遍，锁定引物和模版。我的模板质粒非常异常，超螺旋的部分亮度太亮了。引物有一个也是用了好久的。
说了半天，你的情况我觉得是cDNA浓度太高，或者你加的量过多 ...

嘿嘿 首先感谢下  但是我做了几个梯度  反转的cDNA我分别稀释了10倍、50倍、80倍、100倍 但是条带还是很弥散 那几个梯度P的结果都基本一样 稀释的模板我也都是加1ul 50的体系
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-02 17:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-02 20:42:33
Lee_Py(金币+2): 2011-06-04 15:49:38
引用回帖:
Originally posted by Lee_Py at 2011-06-02 17:07:38:
嘿嘿 首先感谢下  但是我做了几个梯度  反转的cDNA我分别稀释了10倍、50倍、80倍、100倍 但是条带还是很弥散 那几个梯度P的结果都基本一样 稀释的模板我也都是加1ul 50的体系

引物特异性不好吧。
我以前P侧翼序列时。经常P出弥散带，就是真实PCR的反映。结果优化后能P出单一条带也是单引物自扩结果。

如果你一定要优化条件，可以用TOUCH DOWN。 就是退火逐步降低。我的经验是能筛到单一条带。但不保证是你要的目的条带。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-02 17:17:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

churchill87426

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-02 20:42:43
Lee_Py(金币+3): 2011-06-04 15:49:46
LZ 的目的条带多长啊？其实内标很好并不能说明cDNA好啊，我这段时间做的用国产试剂盒反转录就能出actin但是目的条带不出（目的条带2100bp）,后来换个进口反转录试剂盒，一次目的条带就出了，当然actin也出。 不知道LZ最后P出来目的条带没啊？
另外引物特异性问题，LZ可以用NCBI上blast一下，看看非特异性扩增多不多，如果不行就试一下改改引物。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-02 18:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Lee_Py 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085602化学工程350，调剂，有没有211的 +4 利好利好. 2026-03-02 7/350 2026-03-02 21:46 by sunny81
[考研] 接收调剂 +6 津萌津萌 2026-03-02 14/700 2026-03-02 20:59 by 汪！？！
[考研] 材料复试调剂 +5 学材料的点 2026-03-01 6/300 2026-03-02 20:01 by hypershenger
[考研] 化学，材料，环境类求调剂 +7 考研版棒棒 2026-03-02 7/350 2026-03-02 19:56 by hypershenger
[考研] 271求调剂 +3 Ricardo1113 2026-03-02 3/150 2026-03-02 19:53 by zhukairuo
[考研] 0805总分292，求调剂 +10 幻想之殇 2026-03-01 10/500 2026-03-02 19:51 by zhukairuo
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+6 vida_a 2026-03-01 16/800 2026-03-02 19:13 by zhukairuo
[考研] 一志愿东北大学化学314分求调剂 +3 lr1212.. 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:36 by yeahyou
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 14/700 2026-03-02 16:09 by 今夏不夏
[考研] 303求调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-02 15:01 by 向上的胖东
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +6 ieewxg 2026-02-25 7/350 2026-03-02 12:44 by stidwellNK
[考研] 材料学硕318求调剂 +14 February_Feb 2026-03-01 16/800 2026-03-02 11:17 by yuchj
[考研] 284求调剂 +10 天下熯 2026-02-28 11/550 2026-03-02 11:03 by 无际的草原
[考研] 材料类求调剂 +11 wana_kiko 2026-02-28 14/700 2026-03-02 08:46 by 聪明的大松鼠
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭