应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 想问下在以cDNA为模板时，PCR的结果却是徒步 什么原因
51/1返回列表
查看: 1485  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Lee_Py

银虫 (小有名气)

[求助] 想问下在以cDNA为模板时，PCR的结果却是徒步 什么原因

用内标P的结果就很好 说明不是CDNA的问题  但是为啥用自己的引物却P那么差 P的根marker一样
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-02 12:56:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-02 20:42:33
Lee_Py(金币+2): 2011-06-04 15:49:38
引用回帖:
Originally posted by Lee_Py at 2011-06-02 17:07:38:
嘿嘿 首先感谢下  但是我做了几个梯度  反转的cDNA我分别稀释了10倍、50倍、80倍、100倍 但是条带还是很弥散 那几个梯度P的结果都基本一样 稀释的模板我也都是加1ul 50的体系

引物特异性不好吧。
我以前P侧翼序列时。经常P出弥散带，就是真实PCR的反映。结果优化后能P出单一条带也是单引物自扩结果。

如果你一定要优化条件，可以用TOUCH DOWN。 就是退火逐步降低。我的经验是能筛到单一条带。但不保证是你要的目的条带。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-02 17:17:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-06-02 20:42:25
我最近做拼接PCR也是弥散带，把所有的东西都换了一遍，锁定引物和模版。我的模板质粒非常异常，超螺旋的部分亮度太亮了。引物有一个也是用了好久的。
说了半天，你的情况我觉得是cDNA浓度太高，或者你加的量过多了，不妨说详细点，大家研究研究
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-02 15:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lee_Py

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-06-02 15:29:51:
我最近做拼接PCR也是弥散带，把所有的东西都换了一遍，锁定引物和模版。我的模板质粒非常异常，超螺旋的部分亮度太亮了。引物有一个也是用了好久的。
说了半天，你的情况我觉得是cDNA浓度太高，或者你加的量过多 ...

嘿嘿 首先感谢下  但是我做了几个梯度  反转的cDNA我分别稀释了10倍、50倍、80倍、100倍 但是条带还是很弥散 那几个梯度P的结果都基本一样 稀释的模板我也都是加1ul 50的体系
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-02 17:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lee_Py

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-06-02 15:29:51:
我最近做拼接PCR也是弥散带，把所有的东西都换了一遍，锁定引物和模版。我的模板质粒非常异常，超螺旋的部分亮度太亮了。引物有一个也是用了好久的。
说了半天，你的情况我觉得是cDNA浓度太高，或者你加的量过多 ...

嘿嘿 首先感谢下  但是我做了几个梯度  反转的cDNA我分别稀释了10倍、50倍、80倍、100倍 但是条带还是很弥散 那几个梯度P的结果都基本一样 稀释的模板我也都是加1ul 50的体系
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-02 17:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600求调剂 +3 LRZZZZZZ 2026-03-02 3/150 2026-03-02 16:58 by zeng1010
[考研] 理学，工学，农学调剂，少走弯路，这里欢迎您！ +3 likeihood 2026-03-02 5/250 2026-03-02 16:37 by ZRH_878
[考研] 295求调剂。一志愿报考郑州大学化学工艺学硕，总分295分 +5 yl1 2026-03-02 5/250 2026-03-02 15:24 by sucesssucess
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +4 Qwertyuop 2026-03-01 4/200 2026-03-02 14:27 by 升格阿达
[考博] 诚招农业博士 +3 心欣向荣 2026-02-28 3/150 2026-03-02 13:33 by 时间不狗
[考研] 338求调剂 +3 18162027187 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:12 by houyaoxu
[考研] 化工270求调剂 +8 什么名字qwq 2026-03-02 8/400 2026-03-02 13:03 by houyaoxu
[考研] 0805总分292，求调剂 +8 幻想之殇 2026-03-01 8/400 2026-03-02 12:51 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +3 熬夜的猫头鹰 2026-03-02 3/150 2026-03-02 11:45 by 刘兵
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +6 wsl111 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:00 by ydudjddnd
[考研] 264求调剂 +4 巴拉巴拉根556 2026-02-28 4/200 2026-03-02 10:48 by yuchj
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭