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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 那位大虾说说能否用聚丙烯酰胺检测DNA和RNA??
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zhangby2002

银虫 (小有名气)

[求助] 那位大虾说说能否用聚丙烯酰胺检测DNA和RNA??

原来一直用琼脂糖电泳检测DNA和RNA,自己第一次用8﹪的聚丙烯酰胺来检测DNA和RNA 失败，连Marker都跑的不好，DNA和RNA更不用说啦，目的带没跑出来？啥原因呀？？请大虾们解释一下！
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业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。
1楼 2011-06-01 21:50:56
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yj507

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
zhangby2002(金币+1): 2011-06-04 15:07:51
dhd997(金币+2): good 2011-06-04 19:03:34
zhangby2002(金币+1): 2011-06-05 09:57:01
zhangby2002(金币+7): 2011-06-07 20:34:02
PAGE胶需要的上样量少，分离效果好，这个不同浓度分离效果不一样，一般适合分离较小的核酸片段。如果你的marker都跑的不好，很有可能是胶配制有问题，当然这个marker首先要适合跑PAGE胶。不知道你的目的片段多大？
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2楼2011-06-04 13:51:00
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caisanrenju

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 这些问题确实容易被新手忽略 2011-06-05 09:16:52
zhangby2002(金币+1): 2011-06-05 09:56:05
丙烯酰胺胶跑DNA/RNA是绝对没问题的。不知道你用PAGE跑的目的是什么？
PAGE有两个地方必须注意的：
1。必须为非变性聚丙烯胺胶，即跑蛋白的那一套要丢掉，特别是SDS，肯定不能用的。也不必分为浓缩胶和分离胶，当然电泳缓冲液也不能是蛋白的，1XTAE/TBE就可以了
2。如果你的DNA片段超过100bp的话，建议你用6%，甚至以下的PAGE浓度，电泳的电压和时间也要相应长些。
3。电泳完毕后的染色也比较关键。
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3楼2011-06-04 21:36:53
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