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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 淀粉酶的吸光度
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天

[求助] 淀粉酶的吸光度

按照国标法做测试淀粉酶的活性，可是每次到最后的反应液加入稀释成的碘液和盐酸失活时里立马颜色变成黑紫色，吸光度根本没发测试！开始以为是酶的浓度太高（稀释100倍（后来稀释10000倍还是那样，谁做过这方面的，请教一下，是不是淀粉过期了（可溶性淀粉都是先配先做的）还是其他什么问题？
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1楼 2011-05-30 13:25:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

2100541

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
scelab(金币+4): 谢谢回复 2011-07-25 00:40:12
显色时变成紫黑色是淀粉浓度过高，反应不够，说明酶的稀释倍数太大了，应该减小稀释倍数，或者减少反应淀粉使用量。用麻烦一点的办法就是吸取部分反应液再加碘显色。慢慢来，要有耐心哦！
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22楼2011-07-24 23:54:42
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普通回帖

jianghongyu

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
swqowen(金币+2): 2011-05-30 16:33:37
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-31 21:46:53
你可以采用DNS（3、5二硝基水杨酸）法测定酶活
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2楼2011-05-30 15:34:15
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从现在做起

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

swqowen(金币+3): 我在重新配置 2011-05-30 16:33:40
是不是酶的问题，那样似乎淀粉根本没有被水解
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3楼2011-05-30 15:39:30
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ppsu303

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

找不到问题，就都重新配吧
一样一样的来，实验无捷径，耗得起时间和精力吧
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你懂的~~
4楼2011-05-30 16:10:34
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-05-30 19:49:39
国标法是怎么样的，是碘法？碘液的浓度呢？淀粉酶是怎么得来的，现在是什么保存状态，怎么个用法？淀粉溶液是怎样的？盐酸怎么用？整个测定体系是怎样的？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-05-30 16:33:44
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-30 16:33:44:
国标法是怎么样的，是碘法？碘液的浓度呢？淀粉酶是怎么得来的，现在是什么保存状态，怎么个用法？淀粉溶液是怎样的？盐酸怎么用？整个测定体系是怎样的？

淀粉酶是买来的，就在常温下保存，貌似要在冰箱保存，实验室没这条件淀粉溶液用的是绝干2.000克。沸水煮到透明！盐酸是0.1mol的，
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6楼2011-05-30 16:37:11
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
还没完全回答，说不定哪里出错了，不详细就找不出来
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-05-30 17:19:51
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天
引用回帖:
Originally posted by 从现在做起 at 2011-05-30 15:39:30:
是不是酶的问题，那样似乎淀粉根本没有被水解

重新配置了1次，效果还是那样，
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8楼2011-05-30 17:51:33
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-30 17:19:51:
还没完全回答，说不定哪里出错了，不详细就找不出来

空白试验方法：准确吸取20ml 2%可溶性淀粉溶液，置人50ml比色管中．加5ml pH6．0缓冲溶液，摇匀．于7OC水浴预热5min，准确加入lml稀释酶液(酶活力为每毫升60-100单位为宜)，立即计时，摇匀，于70C水浴准确保温酶解反应5min，立即取出1ml反应液，置^含有0，5ml 0．1mol／L盐酸溶液中终止酶解反应，加入5ml稀碘液，摇匀以稀碘液为空白，lcm比色皿，660nm波长下测吸光度【A)，查酶浓度(c)与吸光度(A)对照表，求得酶浓度，再乘以稀释倍数即为被测酶样活力。测试四次取平均值.这是设计的空白试验方案，但每次颜色都显示黑色。
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9楼2011-05-30 18:13:08
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天
引用回帖:
Originally posted by swqowen at 2011-05-30 18:13:08:
空白试验方法：准确吸取20ml 2%可溶性淀粉溶液，置人50ml比色管中．加5ml pH6．0缓冲溶液，摇匀．于7OC水浴预热5min，准确加入lml稀释酶液(酶活力为每毫升60-100单位为宜)，立即计时，摇匀，于70C水浴准确保温 ...

自己做了 几次都没找出问题，每次感觉用移液枪滴一滴的时候，颜色立即成为黑棕色，慢慢沉淀下去，那吸光度没法测，都大于1（酶已经稀释1000倍了）希望学长给予指点，谢谢！
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10楼2011-05-30 18:16:04
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